Buccal Swab/FTA Card DNA Isolation Kit Genomic DNA Extraction poʻo le Purifiaction Kit mai Buccal Swabs
Fa'amatalaga o pusa:
Fa'amama vave le DNA genomic sili ona lelei mai fa'ata'ita'iga o le buccal swab/FTA Card.
◮Leai se fa'aleaga RNase:Ole DNA-Only Column na saunia e le pusa e mafai ai ona aveese le RNA mai le genomic DNA e aunoa ma le faʻaopoopoina o le RNase i le taimi o le suʻega, e puipuia ai le falesuesue mai le faʻaleagaina e le RNase ese.
◮Saosaoa vave:O le Foregene Protease e sili atu lona gaioioiga nai lo mea fa'apena fa'apena, ma fa'ato'a eliina fa'ata'ita'iga a le tino;e faigofie le taotoga, ma e mafai ona maeʻa le faʻaogaina o le DNA genomic i totonu ole 20-80 minute.
◮Faigofie:O le centrifugation e faia i le vevela o le potu, ma e leai se manaʻoga mo le 4 ° C maualalo le vevela centrifugation poʻo le ethanol precipitation o DNA.
◮Saogalemu:E le mana'omia le su'eina o reagent.
◮Tulaga maualuga:O le DNA genomic ua maua mai o loʻo i ai ni vaega tetele, leai se RNA, leai se RNase, ma e matua maualalo le ion content, lea e mafai ona fetaui ma manaʻoga o suʻega eseese.
◮Micro-elution faiga:E mafai ona faʻateleina le faʻaogaina o DNA genomic, lea e faigofie mo suʻesuʻega i lalo poʻo le faʻataʻitaʻiga.
Fa'amatalaga
O lenei pusa o loʻo maua ai se auala lelei ma vave e maua ai le DNA genomic maualuga mai le buccal swabs ma FTA Card (toto toto).Faʻaaogaina o la matou kamupani's DNA tulaga ese-naʻo le silica membrane spin column ma formula, tuʻufaʻatasia ma Foregene Protease, maualuga-concentrate, genomic DNA maualuga e mafai ona maua mai i le 80 minute.O le koluma fa'amamāina fa'apitoa na fa'atulagaina fa'apitoa e fusifusia ai le DNA genomic, ma e mafai ona fa'amama le DNA i se vaega itiiti (15μl) elution system e faʻateleina ai le faʻaogaina o le DNA genomic na maua, lea e faigofie mo suʻesuʻega i lalo poʻo le faʻataʻitaʻiga.E mafai e le pusa ona faʻatautaia se tasi pe sili atu faʻataʻitaʻiga i le taimi, ma o le faʻamamaina o le faʻagasologa e le manaʻomia ai le faʻaaogaina o mea faʻapitoa e pei o le phenol, chloroform, ma le taimi e faʻaalu ai le isopropanol poʻo le ethanol precipitation, ma o le gaioiga e faigofie ma sefe taimi.
Fa'amatalaga
50 Sauniuniga
Vaega o pusa
| Puipui ST1 |
| Puipui ST2 |
| Linear Acrylamide |
| Puipui PW |
| Puipui WB |
| Puipui EB |
| Foregene Protease |
| DNA-Na'o Koluma |
| Faatonuga |
Fa'apitoa & itu lelei
-Leai se RNase fa'aleagaina: O le DNA-Na'o le Column o lo'o tu'uina mai e le pusa e mafai ai ona aveese le RNA mai le genomic DNA e aunoa ma le fa'aopoopoina o le RNase i le taimi o le fa'ata'ita'iga, aloese mai le falesu'esu'e mai le fa'aleagaina e le RNase mai fafo.
-Saosaoa vave: Foregene Protease e maualuga atu le gaioiga nai lo protease tutusa, faʻavave faʻataʻitaʻiga faʻataʻitaʻiga;galuega faigofie.
-Tagata: O le centrifugation e faia i le vevela o le potu, ma e leai se manaʻoga mo le 4 ° C maualalo le vevela centrifugation poʻo le ethanol precipitation o DNA.
-Saogalemu: E le mana'omia se su'ega reagent.
- Tulaga maualuga: O le DNA genomic ua maua mai o loʻo i ai ni vaega tetele, leai se RNA, leai se RNase, ma le maualalo o le ion content, lea e mafai ona ausia manaʻoga o suʻega eseese.
-Micro-elution system: E mafai ona faʻateleina le faʻaogaina o le genomic DNA, lea e faigofie mo le suʻesuʻeina i lalo poʻo le faʻataʻitaʻiga.
Fa'aoga pusa
E fetaui lelei mo le faʻamamaina o DNA genomic mai faʻataʻitaʻiga nei: buccal swabs, FTA Card (pisa toto).
Teuina ma le ola fa'asao
-O lenei pusa e mafai ona teuina mo le 12 masina i lalo ole tulaga mago ile vevela ole potu (15-25°C);afai e manaʻomia le teuina mo se taimi umi, e mafai ona teuina i le 2-8 ° C.
Fa'aaliga: Afai e teu ile vevela maualalo, ole vaifofo e faigofie ile timu.Aʻo leʻi faʻaaogaina, ia mautinoa e tuʻu le vaifofo i totonu o le pusa i le vevela o le potu mo se vaitaimi.Afai e mana'omia, mua'i fa'avevela i totonu o le vai taele 37°C mo le 10 minute e fa'amuta ai le sua, ma fa'afefiloi a'o le'i fa'aaogaina.
-Foregene Protease solution o loʻo i ai se fua faʻapitoa, lea e galue pe a teuina i le vevela o le potu mo se taimi umi (3 masina);o lona gaioiga ma le mautu o le a sili atu pe a teuina i le 4 ° C, o lea e fautuaina ai e teu i le 4 ° C, manatua e aua le teuina i le -20 ° C.
Ua poloka le koluma faamama
I totonu o lenei pusa, i le genomic DNA aveesea faagaioiga, ua tuusao adsorbed le koluma faamamaina i luga o le faataitaiga enzymatic lysis paluga e aunoa ma centrifugation laasaga, ma e mafai ona poloka le koluma faamamaina ona o le enzymization le atoatoa ma viscosity maualuga o le faataitaiga.
O mafua'aga nei e mafai ona fa'apea:
1. E le atoatoa le fa'amamaina ole enzymatic o fa'ata'ita'iga a le tino.
Fautuaga: Ole taimi faʻataʻitaʻiga ole Foregene Protease e mafai ona faʻalautele talafeagai pe mafai ona ave le supernatant pe a uma le centrifugation ile 12,000 rpm (~ 13,400 × g) mo le 5 min.
2. Fa'aaoga soona fai mea fa'ata'ita'iga po'o a'ano lapisi tetele.
Fautuaga: E sili atu le le sili atu i le 1 Buccal swab i le faʻataʻitaʻiga;afai e lapo'a tele le fa'ata'ita'iga, fa'aopoopo le fua ole Buffer ST1, Foregene Protease, fa'apolopolo ST2 e tusa ai.
3. O le faʻataʻitaʻiga viscosity e maualuga tele.
Fautuaga: Fa'ata'ita'iga e mafai ona fa'afefeteina ma le 10 mM o le Tris-HCl a'o le'i fa'ate'aina le DNA genomic.
4. O vaega o le pepa toto ua susu.
Fautuaga: E mafai ona fa'alautele lelei le taimi fa'a'ese'esega le tumau o le Laasaga 6 o le toto toto (FTA Card).
E maualalo fua pe leai se DNA
E masani ona tele mea e aʻafia ai le genomic DNA yield, e aofia ai faʻataʻitaʻiga faʻataʻitaʻiga, faʻataʻitaʻiga tulaga teuina, sauniuniga faʻataʻitaʻiga, togafiti, ma isi.
Genomic DNA e le mafai ona maua i le taimi o le aveeseina
O mafuaʻaga e mafai ona taʻua i lalo:
1. Le fa'asaoina lelei o fa'ata'ita'iga po'o le teuina mo se taimi umi e o'o atu ai i le fa'aleagaina o le DNA genomic.
Fautuaga: E tatau ona fa'ato'a fa'ata'ita'i fa'ata'ita'i solo tu'ugutu, ma e le fautuaina le fa'aogaina o swabs fa'asao mo le su'eina o DNA genomic;fa'ata'ita'iga toto toto e tatau ona fa'amautinoa e agava'a lelei ma e le tatau ona umi tele le taimi e teu ai.
2. O le itiiti o le fa'aogaina o aano e ono le maua ai le DNA genomic tutusa.
Fautuaga: Mulimuli i fa'atonuga o fa'ata'ita'iga o fa'ata'ita'iga o lo'o i totonu o le ta'iala fa'agaioiga, ma solo i le tele o taimi e mafai ai ina ia lava sela e mafai ona fa'apipi'i i le su'ega gutu mo le su'eina o DNA genomic;mo le su'eina o fa'ata'ita'iga toto, e mafai ona fa'asili lelei le vaega e tipi ai le toto.
3. Foregene Protease e le fa'asaoina lelei, e mafua ai le fa'aitiitia o lona gaioiga po'o le fa'agata.
Fautuaga: Fa'amautu tulaga e teu ai le Foregene Protease pe sui i se Foregene Protease fou mo le fa'afoliga enzymatic.
4. O le le lelei o le faʻasaoina o le pusa poʻo le taimi e teu ai e umi tele, e mafua ai le toilalo o nisi o vaega i totonu o le pusa.
Fautuaga: Fa'atau se pusa fou ole Buccal swab DNA mo fa'asologa fa'atatau.
5. E le fa'aopoopoina e Buffer WB le ethanol atoatoa.
Fautuaga: Fa'amaonia o le pa'u WB fa'aopoopo le voluma sa'o o le ethanol atoatoa.
6. E leʻo faʻapipiʻi saʻo le eluent i le ata silikoni.
Fautuaga: Faaopopo le 65 °C eluent eluent pa'u muamua i le ogatotonu o le membrane silicone ma tu'u i le vevela o le potu mo le 5 min e fa'ateleina ai le lelei o le elution.
O DNA genomic e maualalo e maua mai fa'atasi
O mafua'aga nei e mafai ona fa'apea:
1. Le fa'asaoina lelei o fa'ata'ita'iga po'o le teuina mo se taimi umi e o'o atu ai i le fa'aleagaina o le DNA genomic.
Fautuaga: E sili ona fa'ata'ita'i fa'ata'ita'i solo tu'ugutu, ma e le tatau ona fa'aogaina fusu'u fa'asao mo le su'eina o DNA genomic.
2. Afai e la'ititi tele le aofa'i o fa'ata'ita'iga a le tino, o le DNA genomic ua maua mai o le a fa'aitiitia.
Fautuaga: Mulimuli i fa'atonuga o fa'ata'ita'iga ole oral swab o lo'o i totonu o le ta'iala fa'agaioiga, solo i le tele o taimi e mafai ai ina ia lava sela e mafai ona fa'apipi'i i le oral swab mo le su'eina o DNA genomic.
3. Foregene Protease e le fa'asaoina lelei, e mafua ai le fa'aitiitia o lona gaioiga po'o le fa'agata.
Fautuaga: Fa'amautu tulaga e teu ai le Foregene Protease pe sui i se Foregene Protease fou mo le fa'afoliga enzymatic.
4. Fa'afitauli fa'apitoa.
Fautuaga: Fa'aaoga le Buffer EB mo le fa'amama;pe a fa'aaoga le ddH2O po'o isi eluent, fa'amaonia o le pH o le eluate o lo'o i le va o le 7.0-8.5.
5. E le'o sa'o le fa'aopoopoina o le luate i le matāua.
Fautuaga: Faʻaopoopo i ai ni mataua eluent i le ogatotonu o le membrane silicone ma tuʻu i le vevela o le potu mo le 5 min e faʻateleina ai le faʻaogaina o le elution.
6. E la'ititi tele le fa'aputuina o le vai elution.
Fautuaga: Fa'aaoga le eluent mo genomic DNA elution e pei ona mana'omia ile fa'atonuga, ia le itiiti ifo ile 15 μl.
Le mama maualalo o genomic DNA vavaeeseina
Ole mama ole DNA genomic maualalo e mafai ona o'o atu ai i le toilalo po'o le le lelei o fa'ata'ita'iga i lalo, e pei ole: enzymes e le mafai ona tipi tatala, PCR e le mafai ona maua le vaega o le tului, ma isi.
O mafuaʻaga e mafai ona taʻua i lalo:
1. Heteroprotein filogia, RNA filogia.
Iloiloga: E leʻi fufuluina le koluma faʻamamaina e faʻaaoga ai le Buffer PW;e le'i fufuluina le koluma fa'amamāina o le Buffer PW i le fa'aogaina o le saoasaoa centrifugal sa'o.
Fautuaga: Ia mautinoa e leai se timu i totonu o le supernatant a'o le'i faaopoopo i ai le ethanol;ia mautinoa e fufulu le koluma faʻamamaina e tusa ai ma faatonuga, ma e le mafai ona faʻaumatia lenei laasaga.
2. Fa'aleagaina ion le mama.
Au'ili'iliga: Fa'amama WB fa'amama fa'amama fa'amama sa ave'esea pe fufulu na'o le tasi, ma fa'atupu ai le fa'aleagaina o le ionic.
Fautuaga: Ia mautinoa e fufulu le Buffer WB 2 taimi e pei ona faatonuina e aveese ai ion o totoe i le tele e mafai ai.
3. RNA enzyme fa'aleagaina.
Iloiloga: Faʻaopoopo RNases mai fafo i le paʻu;E le sa'o le fa'agaioiina o le fufuluina o le Buffer PW, e mafua ai le RNase toega, e a'afia ai fa'ata'ita'iga fa'ata'ita'iga a le RNA i lalo, e pei o le in vitro transcription.
Fautuaga: Foregene series nucleic acid isolation kits e mafai ona aveese le RNA e aunoa ma le fa'aopoopoina o le RNase, o lea e le mana'omia ai le fa'aopoopoina o le RNase buccal Swab/FTA Card DNA Isolation Kit;ia mautinoa e mulimuli i faʻatonuga mo Buffer PW faʻamamaina koluma faʻamamaina, ma e le mafai ona faʻaumatia lenei laasaga.
4. Ethanol toega.
Su'esu'ega: E le'i faia e Buffer WB le centrifugation faagaau gaogao pe a uma ona fufulu le koluma fa'amamaina.
Fautuaga: Fa'atino le fa'agaioiga sa'o fa'alava faagaau e tusa ai ma fa'atonuga.
5. O isi mea eleelea le mama.
Iloiloga: O faʻataʻitaʻiga faʻasaoina poʻo faʻataʻitaʻiga faʻapitoa e le o muaʻi togafitia.
Fautuaga: Fa'amama lelei le fa'ata'ita'iga e pei ona fa'atonuina.
