Manu Aofa'i RNA Tu'uesea Pusa Aofa'i RNA Pusa ma Fa'amamāina mo Tissue Manu & Cell
Fa'amatalaga o pusa:
Fa'atopetope ma fa'alelei fa'amae'aina le maualuga-mama ma le maualuga o le aofa'i o le RNA mai aano o manu eseese.
Leai se mea e popole ai i le faʻaleagaina o le RNA.Ole faiga atoa ole RNase-Free
Aveese lelei le DNA e faʻaaoga ai le DNA-Cleaning Column
Aveese le DNA e aunoa ma le faʻaopoopoina o le DNAse
Faigofie—o fa'agaioiga uma e fa'auma ile vevela ole potu
Anapogi—e mafai ona fa'auma le ta'aloga ile 30 minute
Saogalemu—leai se vailaau fa'aola fa'aogaina
maualuga mama—OD260/280≈1.8-2.1
Fa'amatalaga Pusa
50 Sauniuniga, 200 Sauniuniga
O lenei pusa e faʻaaogaina levili koluma ma fua fa'atatauatiina ae e la tatou kamupani, lea e mafai ona maua mai le maualuga-mama ma le tulaga maualuga atoa RNA mai aano o manu eseese ma le efficiency maualuga.E maua ai se lelei DNA-Cleaning Column, lea e mafai ona faigofie ona vavae ese ma adsorb genomic DNA mai le supernatant ma lysate tissue, faigofie ma le taimi-faasaoina;RNA-na'o le Column e mafai ona fusifusia lelei le RNA ma e mafai ona fa'agasolo fa'atasi ma se fua fa'apitoa Tele fa'ata'ita'iga.
O le faiga atoa e RNase-Free, ina ia le faʻaleagaina le RNA na maua mai;Buffer RW1, Buffer RW2 faʻapipiʻi fufulu faiga, ina ia maua le RNA e saʻoloto mai le polotini, DNA, ion, ma le faʻaleagaina o mea faʻalaʻau.
Vaega o pusa
| Manu Aofa'i RNA Isolation Kit | ||
| Vaega o pusa | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Puipui RL1* | 25ml | 100ml |
| Puipui RL2 | 15ml | 60ml |
| Puipui RW1* | 25ml | 100ml |
| Puipui RW2 | 24ml | 96ml |
| RNase-Free ddH2O | 10ml | 40ml |
| RNA-na'o Koluma | 50 | 200 |
| DNA-Cleaning Koluma | 50 | 200 |
| Tusi Taiala | 1 fasi | 1 fasi |
Fa'amatalaga o oloa
| Fa'asologa | koluma vili | Vaega o le faamamaina | Foregene koluma, reagent |
| Fulu | 1-24 faʻataʻitaʻiga | Taimi i sauniuniga | ~30 min (24 fa'ata'ita'iga) |
| Centrifuge | centrifuge laulau | Pyrolysis tuueseeseina | Centrifugal separation |
| Fa'ata'ita'iga | Aano o manu;sela | Fa'ata'ita'iga aofa'i | Tisu:10-20 mg;Sel:(1-5)×106 |
| Elution voluma | 50-200 μL | Tulaga maualuga tele | 850 μL |
Fa'apitoa & itu lelei
■ Leai se mea e popole ai e uiga i le faaleagaina o le RNA;ole faiga atoa ole RNase-Free
■ Aveese lelei le DNA-faʻaaogaina le DNA-Cleaning Column
■ Aveese le DNA e aunoa ma le faaopoopoina o le DNase
■ Faigofie-o faagaioiga uma e faamaeaina i le vevela o le potu
■ Saosaoa -e mafai ona faamaeaina i le 30 minute
■ Saogalemu-e le mana'omia se reagent organic
■ maualuga mama -OD260/280≈1.8-2.1
Fa'aoga pusa
E talafeagai mo le aveeseina ma le faʻamamaina o le RNA atoa mai le tele o mea fou pe faʻaisa manu aano poʻo sela faʻaleaganuʻu.
Fa'atauga o oloa
■ Talosaga i lalo: fa'asologa muamua o le cDNA, RT-PCR, mole mole, Blot i Matu, ma isi.
■ Fa'ata'ita'iga: aano o manu, sela fa'atupuina
■ Fuafuaga: Tissue 10-20mg, Cells(2-5)×106
■ Ole maualuga ole gafatia ole fusifusia ole DNA ole koluma fa'amamaina: 80 μg
■ Elution voluma: 50-200 μl
Ata
Manu Aofa'i RNA Isolation Kit togafitia 20mg
Fa'ata'ita'iga o isumu fou, ave 5% fa'amama atoa RNA 1% agar
Glycogel electrophoresis
1: Spleen 2: Fatugao
3: Ate 4: Loto
Teuina ma le ola fa'asa
E mafai ona teu le pusa mo le 24 masina i le vevela o le potu (15-25 ℃) poʻo le 2-8 ℃ mo se taimi umi.E mafai ona teuina le Buffer RL1 i le 4 ℃ mo le 1 masina pe a uma ona fa'aopoopo le β-mercaptoethanol (filifiliga).
Tala fa'atatau
1.IF:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.mRNA-Loaded Lipid-Like Nanoparticles mo Fa'ata'ita'iga Fa'avae A'ai E ala i le Fa'ata'ita'iina o le Fa'asologa Fa'atasiga Tutotonu.Adv.Galuega.Mata.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:He X, Hong W, Yang J, ma isi.O le apoptosis fa'afuase'i o sela i totonu o le sauniuniga o le cell stem e fa'aolaina ai a'afiaga o le immunomodulatory e ala i le tu'uina atu o le phosphatidylserine.Fa'ailo Fa'ailo Fa'atatau i ai.2021 Iulai 14;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF:17.97:Dai Z, Liu H, Liao J, et al.N7-Methylguanosine tRNA suiga e faʻaleleia ai le faʻaliliuga mRNA oncogenic ma faʻateleina le alualu i luma o le cholangiocarcinoma intrahepatic.Cell mol.2021 Iul 29:S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.AFAI:9.225: Cao X, Shu Y, Chen Y, et al.Mettl14-Mediated m6A Suiga e Faʻafaigofie le Faʻafouina o le Atoʻo e ala i le Tausia o le Endoplasmic Reticulum Homeostasis.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
RNA va'aiga pusa mo isi punaoa faʻataʻitaʻigao lo'o avanoa:
Cell, laau, viral, toto, ma isi.
E le maua mai le RNA pe maualalo le RNA
E masani ona tele mea eseese e aʻafia ai le toe faʻaleleia lelei, e pei o: faʻataʻitaʻiga faʻataʻitaʻiga RNA anotusi, auala o le faʻaogaina, voluma elution, ma isi.
1. Ta'ele aisa po'o le cryogenic (4 °C) centrifugation sa faia i le taimi o le taotoga.
Fautuaga: Fa'agaoioi ile vevela ole potu (15-25 ° C) ile faagasologa atoa, aua le ta'ele aisa ma centrifuge ile vevela maualalo.
2. Le fa'asaoina o fa'ata'ita'iga po'o le tele o taimi e teu ai fa'ata'ita'iga.
Fautuaga: Teu fa'ata'ita'iga ile -80 °C po'o le fa'a'aisa ile fa'a'aisa vai ma 'alofia le fa'aaogaina fa'a'aisa-liu;taumafai e fa'aoga aano fou po'o sela fa'aleaganu'u mo le su'eina o le RNA.
3. Le lava fa'ata'ita'iga lysis.
Fautuaga: Pe a faʻafefiloi le aano, ia mautinoa o loʻo lava le faʻaogaina o le aano ma ia lava le vaeluaina o sela o le tino e faʻamatala ai le tuʻuina atu o le RNA.
4. E le sa'o le fa'aopoopoina o le eluent.
Fautuaga: Faʻamaonia le RNase-Free ddH2O le fa'aopoopoina matāua i le ogatotonu o le fa'amama koluma fa'amamāina.
5. E le'i fa'aopoopoina le voluma sa'o o le ethanol atoa ile Buffer RL2 po'o le Buffer RW2.
Fautuaga: Mulimuli i faʻatonuga, faʻaopoopo le voluma saʻo o le ethanol atoatoa ile Buffer RL2 ma le Buffer RW2 ma faʻafefiloi lelei aʻo leʻi faʻaogaina le pusa.
6. Tissue sample dose e le talafeagai.
Fautuaga: Fa'aaoga le 10-20 mg o aano po'o le (1-5) × 106sela i le 500 μl buffer RL1, ona o le tele o le fa'aogaina o le tino e mafai ona fa'aitiitia ai le RNA.
7. Le lelei o le elution volume po'o le le atoatoa o le fa'aogaina.
Fautuaga: O le voluma elution o le koluma faʻamamaina o le 50-200 μl;afai e le faamalieina le aafiaga o le elution, e fautuaina e faʻalautele le taimi e tuʻu ai le vevela o le potu pe a uma ona faʻapipiʻi muamua RNase-Free ddH.2O, fa'ata'ita'iga mo le 5-10 min.
8.O le fa'amamāina koluma ei ai ethanol toega ina ua uma Buffer RW2 fufulu.
Fautuaga: Afai ei ai le ethanol toega pe a uma Buffer RW2 fufulu, centrifugation paipa gaogao mo 1min, o le taimi mo le gaogao gaogao faagaioiga centrifugation e mafai ona faateleina i le 2min, po o le koluma faamamaina e mafai ona tuu i le vevela o le potu mo le 5 min e aveese lelei le ethanol totoe.
O le RNA faʻamamaina ua faʻaleagaina
O le lelei o le RNA faʻamamaina e fesoʻotaʻi ma mea e pei o le faʻasaoina o le faʻataʻitaʻiga, faʻamaʻi RNase, ma le faʻaogaina, ma isi.
1. Tissue samples e le teuina i le taimi.
Fautuaga: Afai e le fa'aaogaina fa'ata'ita'iga o le tino po'o sela i se taimi talafeagai pe a uma ona aoina, fa'asao vave ile -80 °C po'o le fa'asusu vai.Mo le su'eina o le RNA, fa'aaoga se aano fou po'o se fa'ata'ita'iga sela pe a mafai.
2. Fa'a'aisa-fa'aisa fa'ata'ita'iga fa'ata'ita'iga.
Fautuaga: Pe a teuina faʻataʻitaʻiga a le tino, e sili ona tipiina i ni vaega laiti mo le faʻasaoina, ma aveese se tasi o fasi pepa pe a faʻaaogaina e aloese ai mai le toe faʻafefeteina o le faʻataʻitaʻiga ma le faʻaleagaina o le RNA.
3. RNase e fa'afeiloa'i pe le ofuina totigilima tu'ifofo, matapulepule, ma isi mea i le taimi o le taotoga.
Fautuaga: E sili ona lelei le faia o su'esu'ega RNA i totonu o potu eseese RNA manipulation ma kilia le laulau a'o le'i faia le su'ega.
Fa'aofu totigilima ma matapulepule i le taimi o le su'ega e fa'aitiitia ai le fa'aleagaina o le RNA e mafua mai i le fa'aofiina o le RNase.
4. Reagents ua afaina ile RNase ile fa'aoga.
Fautuaga: Sui i se Manu fou Aofa'i RNA Isolation Kit mo su'ega fa'atatau.
5. O le centrifuge tubes, faʻamatalaga, ma isi mea faʻaaogaina i le faʻaogaina o le RNA e faʻaleagaina i le RNase.
Fautuaga: Faʻamaonia o le centrifuge tubes, tips, pipettes, ma isi mea faʻaaoga i le RNA extraction e RNase-Free uma.
Fa'amamāina maua RNA a'afia fa'ata'ita'iga i lalo
RNA fa'amamāina e le fa'amamāina koluma, pe afai o le masima ions, porotini anotusi e tele tele o le a a'afia ai le fa'ata'ita'iga i lalo, e pei o le: toe fa'aliliuina, North Blot et al.
1. O le elutioned RNA o lo'o i ai toega ion masima.
Fautuaga: Fa'amaonia ua fa'aopoopoina le voluma sa'o o le ethanol i le Buffer RW2 ma fa'atino 2 fa'amama fa'amama koluma i le saosaoa centrifugal ua fa'aalia mo le fa'agaioiga;afai o loʻo i ai soʻo se masima o totoe, tuʻu le koluma faʻamamaina i le Buffer RW2 mo le 5 min i le vevela o le potu ma faʻatino le centrifugation e faʻateleina ai le aveeseina o le masima.
2. Ethanol toega i le elutioned RNA.
Fautuaga: Faʻamaonia a maeʻa le fufuluina o le RW2, faʻatino le faʻaogaina o le centrifugation gaogao i le saoasaoa o le centrifugation o loʻo faʻaalia mo le gaioiga, faʻateleina le taimi o le faʻaogaina o le centrifugation tube gaogao i le 2 min pe afai o loʻo i ai pea le ethanol toega, poʻo le tuʻu i le vevela o le potu mo le 5 min pe a maeʻa le centrifugation tube gaogao e faʻateleina le aveesea o toega o le ethanol.
