Tissue Manu Direct PCR kit-UNG (e aunoa ma se Sampling Tools) Protocol
Fa'amatalaga
O lenei pusa o loʻo faʻaogaina se faiga faʻapipiʻi lysis faʻapitoa e faʻasaʻo vave ai le DNA genomic mai faʻataʻitaʻiga o aano o manu mo tali PCR, o lea e sili ona talafeagai mo suʻega faʻatupu tele.
O le faagasologa o le tuʻuina atu o DNA genomic mai le lysis buffer e maeʻa i totonu ole 10-30 minute ile 65°C.Leai se isi faiga e pei ole polotini ma le RNA aveese e mana'omia, ma ole DNA fa'amatuu e mafai ona fa'aoga e fai ma fa'ata'ita'iga mo PCR tali.
2×PCR FaigofieTMFa'afefiloi (UNG) fa'aaoga le dUTP nai lo le dTTP i luga ole fa'avae ole 2×PCR EasyTMFaafefiloi, ma faaopoopo le UNG enzyme (Uracil-N-glycosylase) e mafai ona faʻaleagaina le mamanu o loʻo iai le dUTP i le taimi e tasi.A'o le'i faia le tali a le PCR, e fa'aaogaina le enzyme UNG e fa'aleagaina ai le oloa PCR o lo'o iai le uracil.O le enzyme UNG o le a leai se aʻafiaga i luga o le faʻataʻitaʻiga e le o iai le uracil, ma faʻamautinoa ai le faʻapitoa ma le saʻo o le faʻalauteleina ma le puipuia o le faʻaogaina o oloa PCR i le taimi o suʻega faʻasologa tele.
O le D-Taq DNA polymerase o se DNA polymerase na fa'apitoa ona atia'e e Foregene mo tali sa'o PCR.O le D-Taq DNA polymerase e malosi lona fa'apalepale i ituaiga PCR fa'alavelave fa'alavelave, ma e mafai ona fa'atupuina lelei le aofa'i o DNA i faiga fa'alavelave lavelave eseese, ma e mafai ona o'o atu i le 2Kb/min le saoasaoa fa'aopoopo, lea e fetaui lelei mo le tali atu o le PCR Direct.
Vaega o pusa
Vaega I | Puipui AL |
Foregene Protease | |
6x DNA Loading Buffer | |
Vaega II | 2×PCR FaigofieTMFa'afefiloi(UNG) |
Fa'apitoa & itu lelei
■Leai se taimi faʻaalu ma taugata faʻamamaina DNA
■ E laʻititi le manaʻoga faʻataʻitaʻiga, e pei o le 5mg manu manu e mafai ona suʻeina.
■ E leai se togafitiga faʻapitoa e pei o le oloina ma le tuʻimomomoina e manaʻomia, ma o le taotoga e faigofie.
■ Optimized PCR system e maua ai le PCR e maualuga atu le fa'apitoa ma le malosi o le fa'apalepale i PCR tali fa'alavelave.
■ faiga PCR e tetee atu i le filogia 2×PCR FaigofieTMFa'afefiloi (UNG) fa'amuta lelei le fa'aleagaina e mafua mai i oloa PCR ma fa'amautinoa le fa'apitoa ma le sa'o o le fa'asili.
Fa'asologa o pusa
Fa'aoga: 'ese'ese o aano o manu.
DNA fa'amatu'u mai le fa'ata'ita'iga lysis: na'o le fa'aaogaina o se ata PCR.
O le pusa e mafai ona faʻaogaina mo faʻamoemoega nei: faʻamaonia o le transgenosis, faʻasologa o manu, ma isi.
Fa'agasologa o galuega
Teuina ma le ola fa'asao
Vaega I o lenei pusa e tatau ona teuina i le 2-8℃.
E mafai ona teuina le Reagent Buffer AL mo le 12 masina i lalo o tulaga mago;e mafai ona teuina i le 2-8℃mo le teuina umi.
Reagent Foregene Protease ei ai se fua fa'atatau.Ina ia mautinoa lona gaioiga ma le mautu, faamolemole teu i le 4℃mo le 12 masina.
Reagent 6×DNA Loading Buffer e mafai ona teuina i le 4℃pe -20℃mo se taimi umi.
Vaega II o lenei pusa e tatau ona teuina i le -20℃.
Reagent 2×PCR FaigofieTMFaafefiloi (UNG), pe a faʻaaoga soo, e mafai foi ona teuina i le 4℃mo le teuina mo taimi pupuu (fa'aaoga i totonu ole 10 aso).