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Fa'amatalaga

O lenei pusa o loʻo faʻaogaina le koluma vili ma fua faʻatatau na fausia e Foregene, lea e mafai ona maua lelei le RNA maualuga-mama ma maualuga maualuga mai sela na faʻatupuina ile 96, 24, 12, ma le 6-well plates.

O le pusa e maua ai se DNA-Cleaning Column lelei, lea e faigofie ona tu'u'ese'ese le supernatant ma le cell lysate, fusifusia ma aveese genomic DNA.O le taotoga e faigofie ma sefe taimi.

O le RNA-na'o le Column e mafai ona fa'amauina lelei le RNA i se fua fa'atatau.O se numera tele o faʻataʻitaʻiga e mafai ona faʻatautaia i le taimi e tasi.

Vaega o pusa

*Fa'amolemole fai totigilima ma fai ni puipuiga i le taimi o le ta'otoga aua o le Buffer cRL1 ma le Buffer RW1 o lo'o i ai masima fa'afefete.

Fa'apitoa & itu lelei

■ O le faagasologa atoa e faagaoioia i le vevela o le potu (15-25 ℃), e aunoa ma le taele aisa ma le centrifugation maualalo.
■ Ole pusa atoa ole RNase-Free, e leai se mea e popole ai ile faʻaleagaina ole RNA.
■ DNA-Cleaning Column o lo'o fusifusia fa'apitoa ai le DNA, ina ia mafai e le pusa ona aveese fa'ama'i genomic DNA e aunoa ma le fa'aopoopoina o le DNase fa'aopoopo.
■ Mauaina RNA maualuga: RNA-na'o Koluma ma fua fa'atatau e mafai ona fa'amama lelei le RNA.
■ Saosaoa vave: faigofie ona faagaoioia ma mafai ona faamaeaina i le 11 minute.
■ Saogalemu: E le mana'omia se mea fa'aola.
■ Tulaga maualuga: O le RNA faʻamamaina e maualuga le mama, e leai se polotini ma isi mea leaga, ma e mafai ona faʻafeiloaʻi isi suʻega mulimuli ane.

Fa'aoga pusa

E talafeagai mo le aveeseina ma le faʻamamaina o le RNA atoa mai sela faʻaleaganuʻu ile 96, 24, 12, ma le 6-well plates.

Fa'agasologa o galuega

Ata

O le agarose gel ata ma'a o Cell Aofa'i RNA Isolation Kit togafitia le numera eseese o lo'o i luga, 20μl volume elution, ave 2μl faamamaina atoa RNA 1%.

Teuina ma le ola fa'asa

E mafai ona teu le pusa mo le 12 masina i le vevela o le potu (15-25 ℃) poʻo le 2-8 ℃ mo se taimi umi (24 masina).

Buffer cRL1 e mafai ona teuina i le 4 ℃ mo le 1 masina pe a uma ona faaopoopo 2-hydroxy-1-ethanethiol (filifiliga). Matou te faʻalagolago i le malosi faʻainisinia malosi ma faʻaauau pea ona fausia ni tekinolosi faʻapitoa e faʻafetaui ai le manaʻoga o upusii mo China Viral Rna DNA Extraction Kit Magnetic Beads Methods Purification Kit, Matou te faʻafeiloaʻi ma le faʻamaoni e te asiasi mai ia i matou.Faamoemoe ua tatou maua nei le galulue lelei tele mai le gafatia.
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E le maua mai le RNA pe maualalo le RNA

E masani ona tele mea eseese e aʻafia ai le toe faʻaleleia lelei, e pei o: faʻataʻitaʻiga faʻataʻitaʻiga RNA anotusi, auala o le faʻaogaina, voluma elution, ma isi.

1. Ta'ele aisa po'o le cryogenic (4 °C) centrifugation sa faia i le taimi o le taotoga.

Fautuaga: Fa'agaoioi ile vevela ole potu (15-25 ° C) ile faagasologa atoa, aua le ta'ele aisa ma centrifuge ile vevela maualalo.

2. Le fa'asaoina o fa'ata'ita'iga po'o le tele o taimi e teu ai fa'ata'ita'iga.

Fautuaga: Teu fa'ata'ita'iga ile -80 °C po'o le fa'a'aisa ile fa'a'aisa vai ma 'alofia le fa'aaogaina fa'a'aisa-liu;taumafai e fa'aoga aano fou po'o sela fa'aleaganu'u mo le su'eina o le RNA.

3. Le lava fa'ata'ita'iga lysis.

Fautuaga: Pe a faʻafefiloi le aano, ia mautinoa o loʻo lava le faʻaogaina o le aano ma ia lava le vaeluaina o sela o le tino e faʻamatala ai le tuʻuina atu o le RNA.

4. E le sa'o le fa'aopoopoina o le eluent.

Fautuaga: Faʻamaonia le RNase-Free ddH₂O le fa'aopoopoina matāua i le ogatotonu o le fa'amama koluma fa'amamāina.

5. E le'i fa'aopoopoina le voluma sa'o o le ethanol atoa ile Buffer RL2 po'o le Buffer RW2.

Fautuaga: Mulimuli i faʻatonuga, faʻaopoopo le voluma saʻo o le ethanol atoatoa ile Buffer RL2 ma le Buffer RW2 ma faʻafefiloi lelei aʻo leʻi faʻaogaina le pusa.

6. Tissue sample dose e le talafeagai.

Fautuaga: Fa'aaoga le 10-20 mg o aano po'o le (1-5) × 10⁶sela i le 500 μl buffer RL1, ona o le tele o le fa'aogaina o le tino e mafai ona fa'aitiitia ai le RNA.

7. Le lelei o le elution volume po'o le le atoatoa o le fa'aogaina.

Fautuaga: O le voluma elution o le koluma faʻamamaina o le 50-200 μl;afai e le faamalieina le aafiaga o le elution, e fautuaina e faʻalautele le taimi e tuʻu ai le vevela o le potu pe a uma ona faʻapipiʻi muamua RNase-Free ddH.₂O, fa'ata'ita'iga mo le 5-10 min.

8.O le fa'amamāina koluma ei ai ethanol toega ina ua uma Buffer RW2 fufulu.

Fautuaga: Afai ei ai le ethanol toega pe a uma Buffer RW2 fufulu, centrifugation paipa gaogao mo 1min, o le taimi mo le gaogao gaogao faagaioiga centrifugation e mafai ona faateleina i le 2min, po o le koluma faamamaina e mafai ona tuu i le vevela o le potu mo le 5 min e aveese lelei le ethanol totoe.

O le RNA faʻamamaina ua faʻaleagaina

O le lelei o le RNA faʻamamaina e fesoʻotaʻi ma mea e pei o le faʻasaoina o le faʻataʻitaʻiga, faʻamaʻi RNase, ma le faʻaogaina, ma isi.

1. Tissue samples e le teuina i le taimi.

Fautuaga: Afai e le fa'aaogaina fa'ata'ita'iga o le tino po'o sela i se taimi talafeagai pe a uma ona aoina, fa'asao vave ile -80 °C po'o le fa'asusu vai.Mo le su'eina o le RNA, fa'aaoga se aano fou po'o se fa'ata'ita'iga sela pe a mafai.

2. Fa'a'aisa-fa'aisa fa'ata'ita'iga fa'ata'ita'iga.

Fautuaga: Pe a teuina faʻataʻitaʻiga a le tino, e sili ona tipiina i ni vaega laiti mo le faʻasaoina, ma aveese se tasi o fasi pepa pe a faʻaaogaina e aloese ai mai le toe faʻafefeteina o le faʻataʻitaʻiga ma le faʻaleagaina o le RNA.

3. RNase e fa'afeiloa'i pe le ofuina totigilima tu'ifofo, matapulepule, ma isi mea i le taimi o le taotoga.

Fautuaga: E sili ona lelei le faia o su'esu'ega RNA i totonu o potu eseese RNA manipulation ma kilia le laulau a'o le'i faia le su'ega.

Fa'aofu totigilima ma matapulepule i le taimi o le su'ega e fa'aitiitia ai le fa'aleagaina o le RNA e mafua mai i le fa'aofiina o le RNase.

4. Reagents ua afaina ile RNase ile fa'aoga.

Fautuaga: Sui i se Manu fou Aofa'i RNA Isolation Kit mo su'ega fa'atatau.

5. O le centrifuge tubes, faʻamatalaga, ma isi mea faʻaaogaina i le faʻaogaina o le RNA e faʻaleagaina i le RNase.

Fautuaga: Faʻamaonia o le centrifuge tubes, tips, pipettes, ma isi mea faʻaaoga i le RNA extraction e RNase-Free uma.

Fa'amamāina maua RNA a'afia fa'ata'ita'iga i lalo

RNA fa'amamāina e le fa'amamāina koluma, pe afai o le masima ions, porotini anotusi e tele tele o le a a'afia ai le fa'ata'ita'iga i lalo, e pei o le: toe fa'aliliuina, North Blot et al.

1. O le elutioned RNA o lo'o i ai toega ion masima.

Fautuaga: Fa'amaonia ua fa'aopoopoina le voluma sa'o o le ethanol i le Buffer RW2 ma fa'atino 2 fa'amama fa'amama koluma i le saosaoa centrifugal ua fa'aalia mo le fa'agaioiga;afai o loʻo i ai soʻo se masima o totoe, tuʻu le koluma faʻamamaina i le Buffer RW2 mo le 5 min i le vevela o le potu ma faʻatino le centrifugation e faʻateleina ai le aveeseina o le masima.

2. Ethanol toega i le elutioned RNA.

Fautuaga: Faʻamaonia pe a maeʻa le fufuluina o le RW2, faʻatino le gaogao gaogao gaogao faagaioiga faagaioiga i le saosaoa centrifugation faʻaalia mo le faʻagaioiga, faʻateleina le taimi o le gaogao gaogao faagaioiga centrifugation i le 2 min pe afai o loʻo i ai pea le ethanol toega, pe tuʻu i le potu vevela mo le 5 m.