O loʻo i ai nei se tasi o masini gaosiga sili ona maualuga, inisinia ma tagata faigaluega faʻapitoa, vaʻaia lelei le puleaina o faiga ma se faʻataʻitaʻiga tomai faʻatau faʻatauga lagolago mo le tau faʻatau mo le Rapid and High Yeild Virus Total Rna Isolation Extraction Purification Kit Nucleic Acid Detection Kit, "Making the Products of Large Quality" e mautinoa lava o le faʻamoemoega tumau o la tatou atinaʻe.Matou te faia taumafaiga e le faʻamutaina ia iloa le faʻamoemoe o le "Matou te Taofi Pea i le Saosaoa ma le Taimi".
Ua i ai nei se tasi o masini gaosiga sili ona maualuga, inisinia poto masani ma agavaʻa ma tagata faigaluega, vaʻaia lelei faiga pulea ma se faauo tomai faʻatau vaega muamua / mulimuli-faʻatau lagolago moSaina Universal Rna DNA Reagents ma fa'amamāina otometi nucleic acid, Ina ia mafai ona faʻatinoina la matou sini o le "faʻatau muamua ma manuia tutusa" i le galulue faʻatasi, matou te faʻatuina se au inisinia faʻapolofesa ma se au faʻatau e tuʻuina atu le auaunaga sili e faʻamalieina ai manaʻoga a matou tagata faʻatau.Faʻafeiloaʻi oe e galulue faʻatasi ma matou ma faʻatasi ma matou.O matou o lau filifiliga sili.
Tusi Taiala:La'au Aofa'i RNA Isolation Kit Plus Tusi Fa'atonuga

O loʻo i ai nei se tasi o masini gaosiga sili ona maualuga, inisinia ma tagata faigaluega faʻapitoa, vaʻaia lelei le puleaina o faiga ma se faʻataʻitaʻiga tomai faʻatau faʻatauga lagolago mo le tau faʻatau mo le Rapid and High Yeild Virus Total Rna Isolation Extraction Purification Kit Nucleic Acid Detection Kit, "Making the Products of Large Quality" e mautinoa lava o le faʻamoemoega tumau o la tatou atinaʻe.Matou te faia taumafaiga e le faʻamutaina ia iloa le faʻamoemoe o le "Matou te Taofi Pea i le Saosaoa ma le Taimi".
Tau sii mai moSaina Universal Rna DNA Reagents ma fa'amamāina otometi nucleic acid, Ina ia mafai ona faʻatinoina la matou sini o le "faʻatau muamua ma manuia tutusa" i le galulue faʻatasi, matou te faʻatuina se au inisinia faʻapolofesa ma se au faʻatau e tuʻuina atu le auaunaga sili e faʻamalieina ai manaʻoga a matou tagata faʻatau.Faʻafeiloaʻi oe e galulue faʻatasi ma matou ma faʻatasi ma matou.O matou o lau filifiliga sili.

Ua fa'apipi'i le koluma

A maeʻa ona faʻapipiʻi le koluma, e faʻaitiitia le fua o le RNA poʻo le le mafai foi ona faʻamamaina le RNA, ma e maualalo le tele o le RNA.

Su'esu'ega mafua'aga masani:

1. Fa'ata'ita'iga malologa e le mae'ae'a.

O le gau o fa'ata'ita'iga e le'o fa'agata atoa ai le poloka o le DNA-CLEANING COLUMN, ae a'afia ai le RNA ma le lelei.Matou te fautuaina le faʻavaveina o le faʻaogaina o le gaioiina i totonu o le vai e lava le nitrogen pe a e talepeina faʻataʻitaʻiga, Taumafai e tuʻimomomoina le puipui sela faʻataʻitaʻi, membrane sela ma isi mea.Mo fa'ata'ita'iga o la'au o polyol polysaccharides, matou te fautuaina e te fa'aogaina le Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.

2. A fa'asusu le supa fa'ata'ita'iga tu'ueseese ma le DNA-Cleaning Column, e mafai ona manavaina le ma'a e mafai ona fa'amama.

O le palapala vaevaega o sela e ave o le a mafua ai le RNA-ONLY Column lea o le a poloka pe a faia le gaioiga RNA adsorption (silasila i le Laasaga 6).Matou te fautua atu ia te oe ma le faaeteete pe a mitiia lenei supernatant e aloese ai mai otaota sela e susu.

3. Fa'ata'ita'iga le aofa'i muamua e tele naua.

O le tele o le fa'aogaina o fa'ata'ita'iga o le a i'u ai i le le atoatoa o fa'ata'ita'iga vaevaega po'o le le atoatoa o le lysis sela e Buffer PSL1, e mafua ai le poloka o le koluma fa'amamāina a'o fa'amamāina.La'au Aofa'i RNA Isolation Kit O fa'ata'ita'iga ta'itasi fa'amama e 50 mg.Mo fa'ata'ita'iga o la'au o polyol polysaccharides, matou te fautua atu e te taumafai i le Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.

4. O le vevela o le centrifuge e maualalo tele.

O le fa'aesea atoa o le RNA ma le fa'amamaina o lo'o faia i le vevela o le potu (20-25°C), sei vagana ai o le mea faʻataʻitaʻiga o loʻo malepelepe e le vai. O le vevela o nisi cryogenic centrifuges e maualalo ifo nai lo le 20℃, e ono mafua ai le poloka o le DNA-Cleaning Column ma/po'o le RNA-Na'o Koluma.Afai e tupu lenei mea, seti le vevela centrifuge i le 20-25℃, maia mautinoa o le paluga lysis ma/po'o le supa e fa'aopoopo i le ethanol sa mua'i fa'avevela i le 37°C.

Leai se RNA e maua mai pe RNA fua e maualalo

E masani ona tele mea e aʻafia ai le toe faʻaleleia lelei, e pei o le: faʻataʻitaʻiga RNA anotusi, metotia faʻagaioiga, le elution volume, ma isi.

Iloiloga o mafuaʻaga masani e pei o lalo:

1.O le taele aisa po o le maualalo o le vevela (4°C) centrifugation sa faia i le taimi o le taotoga.

Fautuaga: Fa'atino ile vevela ole potu (15-25°C) i le faagasologa atoa, aua le faia le taele aisa ma le centrifugation maualalo vevela.

2. Ua faʻaleagaina le RNA ona o le le lelei o le faʻasaoina o le faʻataʻitaʻiga poʻo le faʻasaoina umi o le faʻataʻitaʻiga.

Fautuaga: E tatau ona vave fa'aaisa fa'ata'ita'iga fa'ato'a fa'ato'a fa'ato'a fa'aaisa i le vai, ona teu lea i le -80°C mo se taimi umi, aloese mai le fa'a'aisa fa'alua ma le fa'asao o fa'ata'ita'iga;pe fa'asusu vave fa'ata'ita'iga ile RNA stabilizer RNAlater solution (fa'ata'ita'iga manu).

3. Le lava faʻataʻitaʻiga fragmentation ma lysis taʻitaʻia i le poloka o le koluma faʻamamaina.

Fautuaga: Pe a oloina le aano, faamolemole ia mautinoa o loʻo lava le palapala, ma vave faʻafeiloaʻi i le PSL1 Buffer na saunia muamua (faʻamaonia ua faʻaopoopoina le saʻo o le β-ME, vaʻai i le laasaga 1 o le faʻatinoga).

4. Ua le sa'o le fa'aopoopoina o le eluent.

Fautuaga: Ia mautinoa o le RNase-Free ddH2O o loʻo faʻafefe i le ogatotonu o le faʻamama o le koluma faʻamamaina.

5. E le'i fa'aopoopoina le voluma sa'o o le ethanol atoa ile Buffer PSL2 po'o le Buffer PRW2.

Fautuaga: Fa'amolemole mulimuli i fa'atonuga, fa'aopoopo le voluma sa'o o le ethanol atoatoa ile Buffer PSL2 ma le Buffer PRW2 ma fa'afefiloi lelei a'o le'i fa'aoga le pusa.

6.O le aofaʻi o faʻataʻitaʻiga o mea e le talafeagai.

Fautuaga: Fa'aaoga le 50 mg o mea'ai ile 500 μl ole Buffer PSL1.O le fa'aaogaina tele o aano o le a fa'aitiitia ai le aofa'i o le RNA e maua mai ma o le a fa'aitiitia fo'i le mama o le RNA e maua mai ai.Matou te fautuaina malosi e le tatau ona sili atu i le 50 mg le faʻataʻitaʻiga faʻataʻitaʻiga i le faʻaogaina o le RNA.

7. le talafeagai le elution voluma po o le le atoatoa elution.

Fautuaga: O le voluma eluent o le koluma faʻamamaina o le 50-200 μl;pe afai e le faamalieina le aafiaga o le elution, e fautuaina e faalautele le taimi i le vevela o le potu pe a uma ona faaopoopo preheated RNase-Free ddH2O, pei ole 5-10min.

8. O le fa'amamāina koluma ei ai le ethanol toega pe a uma ona fufulu ma BufferPRW2.

Fautuaga: Afai e centrifuged le paipa gaogao mo 1 min ma o loo i ai pea ethanol totoe pe a uma ona fufulu i Buffer PRW2, e mafai ona e faateleina le taimi o le centrifugation tube gaogao i le 2 min, pe tuu le koluma faamamaina i le vevela o le potu mo 5 min e aveese atoa le ethanol totoe.

9. Na fa'aaoga sese le pusa.

Fautuaga: Mo la'au fa'ata'ita'iga o polyphenolic polysaccharides, fa'aaoga pusa masani e pei ole Plant Total RNA Isolation Kit atonu e le mafai ona maua ni fa'ata'ita'iga RNA lelei.Matou te fautuaina oe e faʻaaoga le Plant Total RNA IsolationKit Plus, lea e faʻapitoa mo faʻataʻitaʻiga polyphenolic polysaccharide laau.O se pusa na fausia fa'apitoa mo le su'eina o le RNA mai fa'ata'ita'iga o la'au polyphenol ma polysaccharide.

OD260/OD280 tau maualalo

RNA elution ma le ddH2O ma fa'aoga mo su'ega spectrophotometer e maua ai le maualalo o tau OD260/OD280.Matou te fautuaina le faʻaaogaina o le 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 (nai lo le RNase-Free ddH2O e faʻamalo ai le RNA) ina ia maua ai le saʻo lelei o le OD260/OD280, tagaʻi i le "RNA Concentration and Purification Assays" i le itulau 19.

O le RNA faʻamamaina ua faʻaleagaina

Ole tulaga lelei ole RNA fa'amamāina e feso'ota'i ma mea taua e pei ole fa'asaoina o fa'ata'ita'iga, fa'aleagaina o le RNase, ma le fa'aogaina.

Iloiloga o mafuaʻaga masani:

1. Tissue samples e leʻi teuina i le taimi pe a uma le aoina.

Fautuaga: Afai e le faʻaaogaina faʻataʻitaʻiga i le taimi pe a maeʻa le aoina, faʻamolemole teu i totonu o le nitrogen vai i le maualalo o le vevela vave pe faʻafeiloaʻi i le -80 ° C mo le teuina umi pe a maeʻa vave le malulu i le vai, pe faʻaofuina faʻataʻitaʻi i le RNA stabilizer RNAlater solution (faʻataʻitaʻiga manu).Mo le su'eina o le RNA, taumafai e fa'aoga fa'ata'ita'iga o mea'ai fou faatoa aoina.

2. Toe fa'a'aisa ma fa'afefeteina o fa'ata'ita'iga a le tino.

Fautuaga: Pe a teuina faʻataʻitaʻiga a le tino, e sili ona tipi i ni vaega laiti mo le faʻasaoina, ma ave i fafo se vaega pe a faʻaaogaina e aloese ai mai le faʻaleagaina o le RNA e mafua mai i le faʻamalo faifai pea ma le liusua o faʻataʻitaʻiga.

3. RNase e faʻafeiloaʻi i totonu o le potu taʻavale poʻo le le ofuina o totigilima, matapulepule, ma isi.

Fautuaga: E sili ona lelei le faia o faʻataʻitaʻiga o le RNA i galuega eseese a le RNA, ma e tatau ona faʻamama le laulau suʻesuʻe aʻo leʻi faia le suʻega, ma e tatau ona ofuina totigilima ma matapulepule i le taimi o le suʻega e aloese ai mai le faʻaleagaina o le RNA e mafua mai i le faʻaofiina o le RNase i le tele.

4.O le reagent e faʻaleagaina e RNase i le taimi o faʻaoga.

Fautuaga: Sui i se fa'asologa fou o pusa fa'ato'a fa'atosina RNA mo su'ega fa'atatau.

5. The centrifuge tubes ma pipette tips faʻaaogaina mo le faʻaogaina o le RNA ua faʻaleagaina i le RNase.

Fautuaga: Ia mautinoa o paipa centrifuge, faʻamatalaga paipa, paipa, ma isi mea faʻaaoga i le RNA faʻapipiʻiina o RNase-Free uma.

Tusi Taiala:

La'au Aofa'i RNA Isolation Kit Plus Tusi Fa'atonuga