Matou te tulituliloaina le faʻatonuga o le pulega o le "O le tulaga maualuga, Fesoasoani e sili, Taʻuleleia e muamua", ma o le a faʻamaoni e fatuina ma faʻasoa manuia i tagata uma mo Saina faʻatau oloa Saina Magpure Ffpe Rna Kit mo.Nucleic Acid Isolation& Purification Kit, Matou te folafola atu e taumafai i le mea sili matou te mafaia e ofoina atu ia te oe oloa sili ona lelei ma aoga ma auaunaga.
Matou te tulituliloaina le pulega faʻavae o le "E tulaga ese le lelei, Fesoasoani e sili, Taʻuleleia e muamua", ma o le a faʻamaoni e fatuina ma faʻasoa manuia i tagata uma moSaina Rna/DNA Extraction Purification, Nucleic Acid Isolation, Faatasi ai ma se faiga faʻaogaina atoatoa, ua manumalo le matou kamupani i se taʻutaʻua lelei mo a matou oloa maualuga, tau talafeagai ma auaunaga lelei.I le taimi nei, o lea ua matou faʻatuina se faiga faʻapitoa tau pulega faʻatautaia i meafaitino o loʻo oʻo mai, gaosiga ma le tuʻuina atu.O le tausisia o le mataupu faavae o le "Faʻaaitalafu muamua ma tagata faʻatau sili", matou te faʻafeiloaʻi ma le faamaoni tagata faʻatau mai le fale ma fafo e galulue faʻatasi ma i matou ma agai i luma faʻatasi e fausia se lumanaʻi manuia.

Fa'amatalaga

50 Preps, 200 Preps O le pusa o loʻo faʻaaogaina le koluma vili ma le fua faʻavae na faia e Foregene, lea e mafai ona faʻaleleia lelei le RNA atoa ma le maualuga o le maualuga o le RNA mai masini eseese o laʻau e iai le maualuga o le polysaccharides poʻo le polyphenols.E maua ai le DNA-Cleaning column lea e faigofie ona aveese genomic DNA mai le supernatant ma le lysate a le tino.RNA-na'o le koluma e mafai ona fusia lelei le RNA.E mafai e le pusa ona fa'agasolo le tele o fa'ata'ita'iga i le taimi e tasi.

O le polokalama atoa e le o iai le RNase, o lea o le RNA mama o le a le faʻaleagaina.E mafai e Buffer PRW1 ma Buffer PRW2 ona fa'amautinoa o le RNA na maua e le o fa'aleagaina e le polotini, DNA, ion, ma mea fa'aola.

Vaega o pusa

Fa'apitoa & itu lelei

■ Fa'agaioiga i le vevela o le potu (15-25 ℃) i le faagasologa atoa, e aunoa ma le ta'ele aisa ma le centrifugation maualalo.■ Pusa atoatoa RNase-Free, leai se mea e popole ai i le faʻaleagaina o le RNA.■ Fa'apitoa mo le fa'amamaina o le RNA mai la'au fa'ata'ita'iga o polysaccharides ma polyphenols.■ DNA-Cleaning Column o lo'o pipii fa'apitoa ile DNA, ina ia mafai e le pusa ona aveese fa'ama'i genomic DNA e aunoa ma le fa'aopoopoina o le DNase.■ Mauaina RNA maualuga: RNA-na'o Koluma ma fua fa'atatau e mafai ona fa'amama lelei le RNA.■ Saosaoa vave: faigofie ona faagaoioia ma mafai ona faamaeaina i totonu o le 30 minute.■ Saogalemu: e le mana'omia se reagent.■ Tulaga maualuga: O vaega RNA faʻamamaina e maualuga le mama, e leai se polotini ma isi mea leaga, ma e mafai ona faʻafeiloaʻi i le tele o faʻataʻitaʻiga faʻataʻitaʻiga.

Fa'atauga o oloa

■ Fa'aoga i lalo: fa'asologa muamua o le cDNA, RT-PCR, molecular cloning, Northern Blot, ma isi mea. ■ Fa'ata'ita'iga: Fa'ato'a fou pe fa'a'aisa tisi laau o polysaccharides ma polyphenols ■ Fuafuaga: 50mg laau toto ■ Maualuluga RNA fusifusia gafatia o le fa'amamāina koluma: 80 μg ■ Elution volume: 50-200μl

Fa'aoga pusa

E talafeagai mo le aveeseina ma le faʻamamaina o le RNA atoa mai faʻataʻitaʻiga o aano o laʻau fou pe faʻaisa (aemaise laʻau laulaau fou) e maualuga le polysaccharide ma le polyphenol.

Fa'agasologa o galuega

Ata

La'au Aofa'i RNA Isolation Kit Plus na gaosia le 50mg o laula'au fou o polysaccharides ma polyphenols, ma le 5% RNA fa'amamaina na fa'ata'ita'iina e le electrophoresis.1: Fa'i 2: Ginkgo 3: Cotton 4: Rimoni

Teuina ma le ola fa'asao

O lenei pusa e mafai ona teuina mo le 24 masina i lalo ole tulaga mago ile vevela ole potu (15-25℃);afai e manaʻomia ona teuina mo se taimi umi, e mafai ona teuina i le 2-8 ℃.Buffer PSL1 e mafai ona tuʻuina i le 4 ℃ mo le 1 masina pe a uma ona faʻaopopo le β-mercaptoethanol (e fautuaina e faʻaopoopo i le taimi lava e tasi o le faʻataʻitaʻiga).Nucleic Acid Isolation& Purification Kit, Matou te folafola atu e taumafai i le mea sili matou te mafaia e ofoina atu ia te oe oloa sili ona lelei ma aoga ma auaunaga.
Saina siiatoaSaina Rna/DNA Extraction Purification, Nucleic Acid Isolation, Faatasi ai ma se faiga faʻaogaina atoatoa, ua manumalo le matou kamupani i se taʻutaʻua lelei mo a matou oloa maualuga, tau talafeagai ma auaunaga lelei.I le taimi nei, o lea ua matou faʻatuina se faiga faʻapitoa tau pulega faʻatautaia i meafaitino o loʻo oʻo mai, gaosiga ma le tuʻuina atu.O le tausisia o le mataupu faavae o le "Faʻaaitalafu muamua ma tagata faʻatau sili", matou te faʻafeiloaʻi ma le faamaoni tagata faʻatau mai le fale ma fafo e galulue faʻatasi ma i matou ma agai i luma faʻatasi e fausia se lumanaʻi manuia.

Ua fa'apipi'i le koluma

A maeʻa ona faʻapipiʻi le koluma, e faʻaitiitia le fua o le RNA poʻo le le mafai foi ona faʻamamaina le RNA, ma e maualalo le tele o le RNA.

Su'esu'ega mafua'aga masani:

1. Fa'ata'ita'iga malologa e le mae'ae'a.

O le gau o fa'ata'ita'iga e le'o fa'agata atoa ai le poloka o le DNA-CLEANING COLUMN, ae a'afia ai le RNA ma le lelei.Matou te fautuaina le faʻavaveina o le faʻaogaina o le gaioiina i totonu o le vai e lava le nitrogen pe a e talepeina faʻataʻitaʻiga, Taumafai e tuʻimomomoina le puipui sela faʻataʻitaʻi, membrane sela ma isi mea.Mo fa'ata'ita'iga o la'au o polyol polysaccharides, matou te fautuaina e te fa'aogaina le Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.

2. A fa'asusu le supa fa'ata'ita'iga tu'ueseese ma le DNA-Cleaning Column, e mafai ona manavaina le ma'a e mafai ona fa'amama.

O le palapala vaevaega o sela e ave o le a mafua ai le RNA-ONLY Column lea o le a poloka pe a faia le gaioiga RNA adsorption (silasila i le Laasaga 6).Matou te fautua atu ia te oe ma le faaeteete pe a mitiia lenei supernatant e aloese ai mai otaota sela e susu.

3. Fa'ata'ita'iga le aofa'i muamua e tele naua.

O le tele o le fa'aogaina o fa'ata'ita'iga o le a i'u ai i le le atoatoa o fa'ata'ita'iga vaevaega po'o le le atoatoa o le lysis sela e Buffer PSL1, e mafua ai le poloka o le koluma fa'amamāina a'o fa'amamāina.La'au Aofa'i RNA Isolation Kit O fa'ata'ita'iga ta'itasi fa'amama e 50 mg.Mo fa'ata'ita'iga o la'au o polyol polysaccharides, matou te fautua atu e te taumafai i le Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.

4. O le vevela o le centrifuge e maualalo tele.

O le fa'aesea atoa o le RNA ma le fa'amamaina o lo'o faia i le vevela o le potu (20-25°C), sei vagana ai o le mea faʻataʻitaʻiga o loʻo malepelepe e le vai. O le vevela o nisi cryogenic centrifuges e maualalo ifo nai lo le 20℃, e ono mafua ai le poloka o le DNA-Cleaning Column ma/po'o le RNA-Na'o Koluma.Afai e tupu lenei mea, seti le vevela centrifuge i le 20-25℃, maia mautinoa o le paluga lysis ma/po'o le supa e fa'aopoopo i le ethanol sa mua'i fa'avevela i le 37°C.

Leai se RNA e maua mai pe RNA fua e maualalo

E masani ona tele mea e aʻafia ai le toe faʻaleleia lelei, e pei o le: faʻataʻitaʻiga RNA anotusi, metotia faʻagaioiga, le elution volume, ma isi.

Iloiloga o mafuaʻaga masani e pei o lalo:

1.O le taele aisa po o le maualalo o le vevela (4°C) centrifugation sa faia i le taimi o le taotoga.

Fautuaga: Fa'atino ile vevela ole potu (15-25°C) i le faagasologa atoa, aua le faia le taele aisa ma le centrifugation maualalo vevela.

2. Ua faʻaleagaina le RNA ona o le le lelei o le faʻasaoina o le faʻataʻitaʻiga poʻo le faʻasaoina umi o le faʻataʻitaʻiga.

Fautuaga: E tatau ona vave fa'aaisa fa'ata'ita'iga fa'ato'a fa'ato'a fa'ato'a fa'aaisa i le vai, ona teu lea i le -80°C mo se taimi umi, aloese mai le fa'a'aisa fa'alua ma le fa'asao o fa'ata'ita'iga;pe fa'asusu vave fa'ata'ita'iga ile RNA stabilizer RNAlater solution (fa'ata'ita'iga manu).

3. Le lava faʻataʻitaʻiga fragmentation ma lysis taʻitaʻia i le poloka o le koluma faʻamamaina.

Fautuaga: Pe a oloina le aano, faamolemole ia mautinoa o loʻo lava le palapala, ma vave faʻafeiloaʻi i le PSL1 Buffer na saunia muamua (faʻamaonia ua faʻaopoopoina le saʻo o le β-ME, vaʻai i le laasaga 1 o le faʻatinoga).

4. Ua le sa'o le fa'aopoopoina o le eluent.

Fautuaga: Ia mautinoa o le RNase-Free ddH2O o loʻo faʻafefe i le ogatotonu o le faʻamama o le koluma faʻamamaina.

5. E le'i fa'aopoopoina le voluma sa'o o le ethanol atoa ile Buffer PSL2 po'o le Buffer PRW2.

Fautuaga: Fa'amolemole mulimuli i fa'atonuga, fa'aopoopo le voluma sa'o o le ethanol atoatoa ile Buffer PSL2 ma le Buffer PRW2 ma fa'afefiloi lelei a'o le'i fa'aoga le pusa.

6.O le aofaʻi o faʻataʻitaʻiga o mea e le talafeagai.

Fautuaga: Fa'aaoga le 50 mg o mea'ai ile 500 μl ole Buffer PSL1.O le fa'aaogaina tele o aano o le a fa'aitiitia ai le aofa'i o le RNA e maua mai ma o le a fa'aitiitia fo'i le mama o le RNA e maua mai ai.Matou te fautuaina malosi e le tatau ona sili atu i le 50 mg le faʻataʻitaʻiga faʻataʻitaʻiga i le faʻaogaina o le RNA.

7. le talafeagai le elution voluma po o le le atoatoa elution.

Fautuaga: O le voluma eluent o le koluma faʻamamaina o le 50-200 μl;pe afai e le faamalieina le aafiaga o le elution, e fautuaina e faalautele le taimi i le vevela o le potu pe a uma ona faaopoopo preheated RNase-Free ddH2O, pei ole 5-10min.

8. O le fa'amamāina koluma ei ai le ethanol toega pe a uma ona fufulu ma BufferPRW2.

Fautuaga: Afai e centrifuged le paipa gaogao mo 1 min ma o loo i ai pea ethanol totoe pe a uma ona fufulu i Buffer PRW2, e mafai ona e faateleina le taimi o le centrifugation tube gaogao i le 2 min, pe tuu le koluma faamamaina i le vevela o le potu mo 5 min e aveese atoa le ethanol totoe.

9. Na fa'aaoga sese le pusa.

Fautuaga: Mo la'au fa'ata'ita'iga o polyphenolic polysaccharides, fa'aaoga pusa masani e pei ole Plant Total RNA Isolation Kit atonu e le mafai ona maua ni fa'ata'ita'iga RNA lelei.Matou te fautuaina oe e faʻaaoga le Plant Total RNA IsolationKit Plus, lea e faʻapitoa mo faʻataʻitaʻiga polyphenolic polysaccharide laau.O se pusa na fausia fa'apitoa mo le su'eina o le RNA mai fa'ata'ita'iga o la'au polyphenol ma polysaccharide.

OD260/OD280 tau maualalo

RNA elution ma le ddH2O ma fa'aoga mo su'ega spectrophotometer e maua ai le maualalo o tau OD260/OD280.Matou te fautuaina le faʻaaogaina o le 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 (nai lo le RNase-Free ddH2O e faʻamalo ai le RNA) ina ia maua ai le saʻo lelei o le OD260/OD280, tagaʻi i le "RNA Concentration and Purification Assays" i le itulau 19.

O le RNA faʻamamaina ua faʻaleagaina

Ole tulaga lelei ole RNA fa'amamāina e feso'ota'i ma mea taua e pei ole fa'asaoina o fa'ata'ita'iga, fa'aleagaina o le RNase, ma le fa'aogaina.

Iloiloga o mafuaʻaga masani:

1. Tissue samples e leʻi teuina i le taimi pe a uma le aoina.

Fautuaga: Afai e le faʻaaogaina faʻataʻitaʻiga i le taimi pe a maeʻa le aoina, faʻamolemole teu i totonu o le nitrogen vai i le maualalo o le vevela vave pe faʻafeiloaʻi i le -80 ° C mo le teuina umi pe a maeʻa vave le malulu i le vai, pe faʻaofuina faʻataʻitaʻi i le RNA stabilizer RNAlater solution (faʻataʻitaʻiga manu).Mo le su'eina o le RNA, taumafai e fa'aoga fa'ata'ita'iga o mea'ai fou faatoa aoina.

2. Toe fa'a'aisa ma fa'afefeteina o fa'ata'ita'iga a le tino.

Fautuaga: Pe a teuina faʻataʻitaʻiga a le tino, e sili ona tipi i ni vaega laiti mo le faʻasaoina, ma ave i fafo se vaega pe a faʻaaogaina e aloese ai mai le faʻaleagaina o le RNA e mafua mai i le faʻamalo faifai pea ma le liusua o faʻataʻitaʻiga.

3. RNase e faʻafeiloaʻi i totonu o le potu taʻavale poʻo le le ofuina o totigilima, matapulepule, ma isi.

Fautuaga: E sili ona lelei le faia o faʻataʻitaʻiga o le RNA i galuega eseese a le RNA, ma e tatau ona faʻamama le laulau suʻesuʻe aʻo leʻi faia le suʻega, ma e tatau ona ofuina totigilima ma matapulepule i le taimi o le suʻega e aloese ai mai le faʻaleagaina o le RNA e mafua mai i le faʻaofiina o le RNase i le tele.

4.O le reagent e faʻaleagaina e RNase i le taimi o faʻaoga.

Fautuaga: Sui i se fa'asologa fou o pusa fa'ato'a fa'atosina RNA mo su'ega fa'atatau.

5. The centrifuge tubes ma pipette tips faʻaaogaina mo le faʻaogaina o le RNA ua faʻaleagaina i le RNase.

Fautuaga: Ia mautinoa o paipa centrifuge, faʻamatalaga paipa, paipa, ma isi mea faʻaaoga i le RNA faʻapipiʻiina o RNase-Free uma.