O loʻo faʻaauau pea e le faʻalapotopotoga le faʻataʻitaʻiga faʻavae "pulega faʻasaienisi, tulaga maualuga ma le lelei, faʻatau sili mo Saina Manufacturer mo 2x Concentrated Premix for Unpurified Sample Real-Time Quantitative PCR Direct Multiplex Probe Qpcr Mix Plus U, O la matou pisinisi e tuuto atu i le tuʻuina atu i tagata faʻatau oloa sili ona lelei ma malupuipuia i tau faʻatau, faʻamalieina a matou tagata faʻatau uma.
O loʻo faʻaauau pea e le faʻalapotopotoga le faiga faʻavae "pulega faʻasaienisi, tulaga maualuga ma le lelei faʻamuamua, faʻatau sili moSaina Taq DNA Polymerase ma Qpcr, O la matou kamupani e tele le malosi ma o loʻo i ai se faiga faʻatauga tumau ma atoatoa.Matou te moomoo maimau pe ana mafai ona matou faʻavaeina sootaga faʻapisinisi lelei ma tagata faʻatau uma mai le fale ma fafo i luga o le faʻavae o faʻamanuiaga tutusa.
Taimi Moni PCR fa'avae mamanu fa'avae

Fa'aimua Fa'asaga i luma ma Fa'ailoga Fa'asaga

Mo PCR Taimi Moni, e taua tele le mamanu muamua.Primers e fesoʻotaʻi ma le faʻapitoa ma le lelei o le PCR faʻalauteleina, ma e mafai ona mamanuina e faʻatatau i mataupu faavae nei:

• Ulua'i umi: 18-30bp.
• GC anotusi: 40-60%.
• Tm tau: Polokalama fa'ailoga muamua, pei ole Primer 5, e mafai ona tu'uina atu le tau Tm ole fa'avae.Ole tau Tm ole pito i luga ma lalo e tatau ona latalata ile mea e mafai ai.E mafai foi ona fa'aoga le fua fa'atatau Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Pe a faia le PCR, o le vevela i lalo ifo o le tau Tm muamua o le 5 °C e masani ona filifilia e avea ma vevela faʻapipiʻi (o le siʻitia tutusa i le vevela faʻafefe e mafai ona faʻateleina le faʻapitoa o le tali PCR).
• Primers ma PCR oloa:

1. Fuafuaga muamua PCR amplification umi o oloa e sili ona lelei 100-150bp.
2. E tatau ona 'alo'ese mai mea fa'apitoa i le vaega lona lua o le fa'ata'ita'iga i le tele e mafai ai.
3. Aloese mai le fa'avaeina o fa'avae fa'aopoopo e 2 pe sili atu i le va o pito 3' ole pito i luga ma lalo.
4. Primer 3′ e le mafai ona iai ma le 3 fa'aopoopo G po'o le C.
5. E le mafai ona iai ni fausaga fa'aopoopo i le primers, a leai o le a fausia se fausaga lauulu, e a'afia ai le fa'alauteleina o le PCR.
6. ATCG e tatau ona tufatufa tutusa tutusa i le faasologa muamua, ma le 3′ fa'avae pito e tatau ona aloese mai le T.

Fa'aopoopo1:Cell DirectRT-qPCR Pusa vaegat pusa faaopoopo

1.Cell Lysis Fofo

 O loʻo faʻaauau pea e le faʻalapotopotoga le faʻataʻitaʻiga faʻavae "pulega faʻasaienisi, tulaga maualuga ma le lelei, faʻatau sili mo Saina Manufacturer mo 2x Concentrated Premix for Unpurified Sample Real-Time Quantitative PCR Direct Multiplex Probe Qpcr Mix Plus U, O la matou pisinisi e tuuto atu i le tuʻuina atu i tagata faʻatau oloa sili ona lelei ma malupuipuia i tau faʻatau, faʻamalieina a matou tagata faʻatau uma.
Saina Gaosi moSaina Taq DNA Polymerase ma Qpcr, O la matou kamupani e tele le malosi ma o loʻo i ai se faiga faʻatauga tumau ma atoatoa.Matou te moomoo maimau pe ana mafai ona matou faʻavaeina sootaga faʻapisinisi lelei ma tagata faʻatau uma mai le fale ma fafo i luga o le faʻavae o faʻamanuiaga tutusa.

Taimi Moni PCR fa'avae mamanu fa'avae

Fa'aimua Fa'asaga i luma ma Fa'ailoga Fa'asaga

Mo PCR Taimi Moni, e taua tele le mamanu muamua.Primers e fesoʻotaʻi ma le faʻapitoa ma le lelei o le PCR faʻalauteleina, ma e mafai ona mamanuina e faʻatatau i mataupu faavae nei:

• Ulua'i umi: 18-30bp.
• GC anotusi: 40-60%.
• Tm tau: Polokalama fa'ailoga muamua, pei ole Primer 5, e mafai ona tu'uina atu le tau Tm ole fa'avae.Ole tau Tm ole pito i luga ma lalo e tatau ona latalata ile mea e mafai ai.E mafai foi ona fa'aoga le fua fa'atatau Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Pe a faia le PCR, o le vevela i lalo ifo o le tau Tm muamua o le 5 °C e masani ona filifilia e avea ma vevela faʻapipiʻi (o le siʻitia tutusa i le vevela faʻafefe e mafai ona faʻateleina le faʻapitoa o le tali PCR).
• Primers ma PCR oloa:

1. Fuafuaga muamua PCR amplification umi o oloa e sili ona lelei 100-150bp.
2. E tatau ona 'alo'ese mai mea fa'apitoa i le vaega lona lua o le fa'ata'ita'iga i le tele e mafai ai.
3. Aloese mai le fa'avaeina o fa'avae fa'aopoopo e 2 pe sili atu i le va o pito 3' ole pito i luga ma lalo.
4. Primer 3′ e le mafai ona iai ma le 3 fa'aopoopo G po'o le C.
5. E le mafai ona iai ni fausaga fa'aopoopo i le primers, a leai o le a fausia se fausaga lauulu, e a'afia ai le fa'alauteleina o le PCR.
6. ATCG e tatau ona tufatufa tutusa tutusa i le faasologa muamua, ma le 3′ fa'avae pito e tatau ona aloese mai le T.

Fa'aopoopo1:Cell DirectRT-qPCR Pusa vaegat pusa faaopoopo

1.Cell Lysis Fofo

Tusi Taiala:

 Vave Faigofie Cell Direct RT-qPCR Kit-Taqman