Fa'amama o pito paipa ma paipa EP, ma isi.

1. Saunia le 0.1% (tasi afe) DEPC (mea e sili ona oona) faʻatasi ai ma vai faʻafefeteina, faʻaoga ma le faʻaeteete i totonu o se pusa asu, ma teu i le 4°C ese mai le malamalama;

Ole vai ole DEPC ole vai mama e togafitia ile DEPC ma fa'amama ile vevela maualuga ma le maualuga.Fa'ata'ita'i e leai se RNase, DNase ma le proteinase.

2. Tuu le pito paipa ma le paipa EP i le 0.1% DEPC, ma ia mautinoa o loʻo faʻatumu le pito paipa ma le EP i le 0.1% DEP.

3. Puipui mai le malamalama, tuʻu i luga, i le po (12-24h)

4. O le atigipusa o loʻo i ai le pito ma le EP tube e le manaʻomia ona faʻafefe i le DEPC.A mae'a ona aveese fa'ata'atia le vai DEPC i le pito po'o le paipa EP, teu i luga ma afifi i luga.

5. 121 tikeri Celsius, 30 min

6. 180 tikeri Celsius, mago mo ni nai itula (a itiiti ifo i le 3 itula)

Manatua: a.Fai totigilima latex ma matapulepule pe a tagofia le DEPC!b, po'o le leai o le DEPC sterilization, 130 ℃, 90min autoclave (tele fale su'esu'e maualuga vevela sterilization faalua)

Fa'atonuga o le RNA

E lua fa'ailoga tetele o le fa'aletonu o le tu'uesea o le RNA

RNA faʻaleagaina ma toega o mea leaga i totonu o aʻu,e uiga i le faʻaleagaina, seʻi o tatou vaʻavaʻai muamua pe aisea e le faigofie ai ona faʻaleagaina le RNA e maua mai i sela faʻaleaganuʻu.O lo'o iai fa'ato'aga RNA o lo'o i ai vaega uma e fa'alavelave vave ai le RNase.Fa'aopoopo le lysate i sela fa'atupu, ma na o le fa'afefiloi, o sela uma e mafai ona fa'afefiloi mae'ae'a ma le lysate, ma fa'amama atoa ai sela.A maeʻa ona faʻamama le sela, o mea aoga i totonu o le lysate e vave faʻalavelaveina le RNase intracellular, o lea e tumau ai le RNA.O lona uiga, talu ai e faigofie ma atoatoa le faʻafesoʻotaʻi o sela faʻaleaganuʻu ma le lysate, o latou RNA e le faigofie ona faʻaleagaina;i le isi itu, o le RNA i totonu o le tino e faigofie ona faʻaleagaina ona o sela i totonu o le tino e le faigofie ona faʻafesoʻotaʻi vave le lysate.ona o le lava fesootaiga.O lea,manatu o loʻo i ai se auala e liliu ai le aano i totonu o se sela e tasi aʻo faʻalavelaveina le gaioiga RNA, o le faʻafitauli o le faʻaleagaina e mafai ona foia atoatoa.

O le viliina o le nitrogen e sili ona aoga.Ae ui i lea, o le auala e viliina ai le nitrogen e matua faigata lava, aemaise lava pe a tele le numera o faʻataʻitaʻiga.O lenei mea na mafua ai le isi mea sili ona lelei: o le homogenizer.O lehomogenizerauala e le mafaufau i le fesili i le auala e taofia ai le gaoioiga RNase ao lei fesootai sela ma le lysate, ae nai lo le tatalo o le fua faatatau o le faaleagaina o le tino e vave atu nai lo le fua faatatau lea intracellular RNase degrades RN.

Ole aʻafiaga ole homogenizer eletise e sili atu,ma o le aʻafiaga o le homogenizer tioata e leaga, ae i se tulaga lautele, e le mafai e le homogenizer auala ona taofia le faʻaleagaina.O le mea lea, afai e faʻaleagaina le faʻaaogaina, e tatau ona faʻaaogaina le homogenizer eletise muamua mo le oloina ma le nitrogen vai;e tatau ona suia le homogenizer tioata muamua i se homogenizer eletise poʻo saʻo milled i le nitrogen vai.Ole fa'afitauli e toetoe lava 100% mafai.maua se faaiuga.

O le fa'afitauli o lo'o totoe o le le mama e a'afia ai su'esu'ega mulimuli ane e sili atu ona 'ese'ese mafua'aga nai lo le fa'aleagaina, ma o fofo e tutusa lelei lava.I le faaiuga,afai o loʻo i ai le faʻaleagaina poʻo le faʻaleagaina o mea leaga i totonu o le aano, e tatau ona faʻamalieina le auala / regent mo mea faʻataʻitaʻi faʻapitoa.E te le tau fa'aogaina au fa'ata'ita'iga taua mo le fa'ata'ita'iina: e mafai ona e fa'atau ni manu laiti e pei o i'a/moa mai le maketi, ave le vaega tutusa o mea mo le RNA fa'ameamea, ma le isi vaega mo le fa'a'a'ina o porotini – olo ma le gutu, manava ma le inumaga.

O le RNA taula'i o le RNA ua maua mai e fa'aaogaina mo su'esu'ega tulitatao eseese, ma o ona tulaga mana'omia e eseese

O le fausiaina o faletusi cDNA e manaʻomia ai le faʻamaoni o le RNA e aunoa ma ni toega o mea e faʻaogaina ai le enzyme;Matu e mana'omia le maualuga o le amiosa'o o le RNA ma le mana'oga maualalo mo toega o mea e fa'aogaina ai le enzyme;E le manaʻomia e le RT-PCR le faʻamaoni RNA maualuga,ae fa'alavelaveina fa'agaioiga enzyme.O mea e mana'omia e toega e sa'o.O le fa'aoga e fa'atatau ai le mea e maua;o taimi uma lava o le sini o le mauaina o le RNA mama sili ona maualuga, o le a tau ai tagata ma tupe.

Aoina/Teuina o Fa'ata'ita'iga

Fa'afitauli e A'afia ai le Fa'aleagaina A mae'a ona tu'ua e le fa'ata'ita'iga le tino ola/po'o le si'osi'omaga o le tuputupu a'e muamua, o le a amata ona fa'aleagaina e le enzymes i totonu o le fa'ata'ita'iga le RNA,ma le fua fa'aleagaina e feso'ota'i ma mea o lo'o i totonu o enzymes ma le vevela.I le masani ai, e na'o le lua lava auala e taofia atoa ai le gaioiga o le enzyme: fa'aopoopo vave le lysate ma fa'afefiloi lelei ma vave;tipi i ni vaega laiti ma vave fa'a'aisa i le nitrogen vai.O auala uma e lua e manaʻomia ai le faʻaogaina vave.O le mea mulimuli e talafeagai mo faʻataʻitaʻiga uma, aʻo le mea muamua e talafeagai mo masini e maualalo le anotusi o sela ma enzymes endogenous ma faigofie ona homogenize.Aemaise lava, aano o la'au, ate, toto, pancreas, spleen, fai'ai, ga'o, maso maso, ma isi e sili ona fa'aaisa i le vai a'o le'i fa'agasolo.

Vaevaeina ma le homogenization o faʻataʻitaʻiga

Mea e A'afia ai le Fa'aleagaina ma le Fa'atupu Fa'ata'ita'iga vaevaega olemo le homogenization mae'ae'a, lea e mo le tuʻuina atu atoatoa ma le atoatoa o le RNA.O sela e mafai ona fa'atasi sa'o e aunoa ma le malepelepe.Fa'ato'a fa'ato'a fa'atasi pe a malepe.O le fefete ma le siama e tatau ona talepe i ni enzymes tutusa a'o le'i mafai ona fa'atasi.Tissues i lalo ifo o le enzyme anotusi ma faigofie homogenization e mafai ona nutimomoia ma homogenized i le taimi e tasi i le lysate e se homogenizer;laau toto, ate, thymus, pancreas, spleen, faiʻai, gaʻo, maso maso ma isi faʻataʻitaʻiga, latou te maualuga i enzymes endogenous pe le faigofie ona homogenized,o lea e tatau ona faia eseese le faʻalavelave faʻalavelave ma le homogenization.O le auala sili ona faʻatuatuaina ma sili ona aoga o le vaevaega o le viliina lea ma le faʻafefe vai, ma o le auala sili ona faʻatuatuaina o le homogenization o le faʻaaogaina lea o se homogenizer eletise.O se fa'amatalaga fa'apitoa e uiga i le viliina ma le vai fa'asusu: e le tatau ona fa'asusu le fa'ata'ita'iga i le faagasologa atoa o le viliina, aua e sili atu ona aoga enzymes fa'ato'aga pe a fa'aisa.

Filifiliga o le lysate

Aʻafia ai le faʻaogaina o le faʻaogaina ma mea o loʻo totoe o mea leaga o loʻo totoe Ole faʻaaogaina masani ole lysis solutions e toetoe lava a faʻalavelaveina le gaioiga a le RNase.O le mea lea, o le autu autu o le filifilia o se lysis solution o le mafaufau lea i le tuʻufaʻatasia ma le auala faʻamamaina.E tasi le tuusaunoaga:faʻataʻitaʻiga ma mea e maua ai le enzyme maualuga e fautuaina e faʻaaoga se lysate o loʻo i ai le phenol e faʻateleina ai le malosi e faʻagata ai enzymes endogenous.

Filifiliga ole auala fa'amamāina

O mea e a'afia ai mea leaga o lo'o totoe, fa'avavevave mo fa'ata'ita'iga mama e pei o sela, e mafai ona maua i'uga fa'amalieina toetoe lava o so'o se auala fa'amamāina o lo'o iai.Ae mo le tele o isi faʻataʻitaʻiga, aemaise lava i latou e maualuga le maualuga o mea leaga e pei o laʻau, ate, siama, ma isi, o le filifilia o se auala faʻamamaina talafeagai e taua tele.Ole auala ole fa'amama centrifugal koluma e maua ai le saoasaoa fa'atosina vave ma e mafai ona fa'amama lelei mea leaga e a'afia ai le tali enzymatic mulimuli ane o le RNA, ae e taugata (Foregene e mafai ona ofoina atu pusa taugofie, sili atu auiliiliga kiliki.iinei);le fa'aogaina o auala fa'amama ma fa'amama masani, e pei o le LiCl precipitation, e mafai fo'i ona maua ni fa'ai'uga fa'amalieina, ae o le taimi fa'atino e umi..

"Tolu A'oa'iga ma Valu Fa'alogo" mo le RNA Extraction

Amioga 1:Faʻamutaina le faʻaleagaina o enzymes mai fafo.

Fa'amatalaga 1:Fa'aofu lelei matapulepule ma totigilima.

Fa'amatalaga 2:E tatau ona matua lafoa'i uma paipa fa'aau, ulu pito, paipa, tane electrophoresis, ma nofoa fa'ata'ita'i o lo'o aofia i le su'ega.

Fa'amatalaga 3:O reagents / fofo o loʻo aʻafia i le suʻega, aemaise le vai, e tatau ona leai se RNase.

Amioga 2:Puipuia le gaioiga o enzymes endogenous

Fa'amatalaga 4:Filifili se metotia homogenization talafeagai.

Fa'amatalaga 5:Filifili se lysate talafeagai.

Fa'amatalaga 6:Pulea le aofa'i amata o le fa'ata'ita'iga.

Amioga 3:Fa'amanino lau fa'amoemoega o le tosoina

Fa'amatalaga 7:Fa'atasi ai ma so'o se faiga lysate e latalata ile aofa'i maualuga amata ole fa'ata'ita'iga, o le fua fa'atatau o le fa'aola e pa'u tele.

Fa'amatalaga 8:Na o le pau lava le tulaga tau tamaoaiga mo le mauaina o le RNA manuia o se manuia i suʻega mulimuli, ae le o le fua.

Top 10 Punavai o le RNase Contamination

1. O tamatamailima o le puna muamua lea o enzymes mai fafo, o lea e tatau ai ona ofuina totigilima ma sui soo.E le gata i lea, e tatau foi ona ofuina matapulepule, aua o le manava o se punavai taua foi o enzymes.O se fa'amanuiaga fa'aopoopo o le fa'aogaina o se matapulepule totigilima o le puipuia lea o le tagata su'esu'e.

2. Pipette tips, centrifuge tubes, pipettes - RNase e le mafai ona faʻagataina e ala i le faʻamaʻiina naʻo ia, o lea e tatau ai ona togafitia faʻamaʻi paipa ma faʻamau faʻatasi ma le DEPC, e tusa lava pe faʻailogaina o loʻo togafitia DEPC.E sili ona lelei le faʻaaogaina o se paipa faʻapitoa, solo i le 75% alcohol cotton polo aʻo leʻi faʻaaogaina, aemaise lava le tootoo;e le gata i lea, ia mautinoa e aua le faʻaaogaina se ulu ulu.

3. E tatau ona leai se fa'aleagaina o le RNase le vai/pa.

4. E tatau ona fufulu mama le laulau su'ega ile 75% o polo cotton ava malosi.

5.Endogenous RNase O masini uma o lo'o i ai enzymes fa'atosina, o le mea lea o le vave fa'aisaina o masini fa'atasi ai ma le nitrogen vai o le auala sili lea e fa'aitiitia ai le fa'aleagaina.O le auala e teu ai / oloina le suavai e matua faigata lava, ae na o le pau lea o le auala mo masini e maualuga le maualuga o enzymes.

6. RNA fa'ata'ita'iga O mea e maua mai ai le RNA e ono iai fa'ailoga ole RNase.

7. Plasmid Extraction E masani ona fa'aogaina e le Plasmid le Rnase e fa'aleagaina ai le RNA, ma o le Rnase o totoe e tatau ona fa'afefeteina ma le Proteinase K ma aveese mai e le PCI.

8. RNA teuina E tusa lava pe teuina i le maualalo o le vevela, o le tele ole RNase o le a mafua ai le faʻaleagaina o le RNA.O le fofo sili mo le faʻasaoina umi o le RNA o le faʻamalolo masima / ava malosi, aua o le ava e faʻalavelave uma gaioiga enzymatic i le maualalo o le vevela.

9. Pe a aofia ai ion (Ca, Mg) nei ions, faʻamafanafana i le 80C mo le 5 minute o le a mafua ai ona vavae le RNA, o lea afai e manaʻomia le faʻamafanafanaina o le RNA, o le vaifofo faʻasao e manaʻomia ona i ai se vailaʻau chelating (1mM Sodium Citrate, pH 6.4).

10. Enzymes fa'aaogaina i su'esu'ega mulimuli ane e ono fa'aleagaina e le RNase.

10 Fautuaga mo le RNA Extraction

1: Vave vave taofia le gaioiga RNase.O faʻataʻitaʻiga e vave faʻaisa pe a maeʻa le aoina, ma e le faʻaaogaina le RNase e ala i le faʻavaveina o gaioiga i le taimi o le lysis.

2: Filifili se auala talafeagai e aveese mai ai mo aano o lo'o i ai le maualuga o le ribozyme, ma o le tino e sili ona lelei le fa'aogaina o le auala o lo'o i ai le phenol.

3: O le lelei o le vavalo e manaʻomia i Matu, o le fausiaina o faletusi cDNA e manaʻomia le maualuga o le amiosaʻo, ma le RT-PCR ma le RPA (Ribonuclease protection assay) e le manaʻomia le maualuga o le amiosaʻo.O le RT-PCR e manaʻomia le mama maualuga (toega o le enzyme inhibitors).

4: O le homogenization maeʻaeʻa o le ki lea i le faʻaleleia o fua ma faʻaitiitia le faʻaleagaina.

5: Siaki le faʻamaoni o le RNA electrophoresis detection, 28S: 18S = 2: 1 o se faʻailoga atoatoa, 1: 1 e talia foi mo le tele o suʻega.

6: Aveese ole DNA mo le RT-PCR, au'ili'ili fa'asologa E sili le fa'aoga ole Dnase I e aveese ai le DNA.

7: Faʻaitiitia le faʻaleagaina o enzymes mai fafo - enzymes e le mafai ona faʻaulufale mai fafo.

8: Pe a faʻatumauina le faʻamaʻi maualalo o le nucleic acid, e tatau ona faʻaopoopo se reagent faʻatasi.Ae ia puipuia le co-precipitant o loʻo i ai enzymes ma DNA contamination.

9: Faʻamavae maeʻaeʻa le RNA, pe a manaʻomia, vevela ile 65C mo le 5 minute.

auala talafeagai e teu ai

E mafai ona teuina i le -20C mo sina taimi puupuu, ma le -80C mo se taimi umi.O le laasaga muamua i le faʻaleleia o le RNA o le iloa lea o le RNA o loʻo i totonu o faʻataʻitaʻiga eseese e eseese tele.Ole maualuga (2-4ug/mg) e pei ole ate, pancreas, fatu, medium abundance (0.05-2ug/mg) e pei ole fai'ai, embryo, fatuga'o, mama, thymus, ovary, maualalo abundance (<0.05ug/mg) mg) e pei ole vevela, ponaivi, ga'o.

1: Lyse sela e faʻasaʻo ai le RN - afai e le faʻamalolo le RNA, o le a faʻaitiitia le fua.E sili atu le aoga o le homogenization eletise nai lo isi metotia homogenization, ae atonu e manaʻomia foi ona tuʻufaʻatasia ma isi metotia, e pei o le faʻafefeteina o le nitrogen mashing, enzymatic digestion (Lysozyme/Lyticase)

2: Fa'asilisiliina o le auala e fa'asili.O faʻafitauli sili ona tele i metotia faʻavae phenol o le le atoatoa stratification ma vaega RNA gau (le supernatant e le mafai ona aveese atoa).O le faʻamaʻi le atoatoa e mafua ona o le maualuga o le nucleic acid ma le protein content, lea e mafai ona foia e ala i le faʻateleina o le lysate faʻaaogaina pe faʻaititia le aofaʻi o faʻataʻitaʻiga.O se laasaga o le chloroform extraction na faaopoopo i le tino.E mafai ona fa'aitiitia le gau o le RNA e ala i le pamu i tua po'o le aveeseina o le fa'aola fa'aola sosoo ai ma le centrifugation.Ole fa'afitauli tele ile koluma centrifugation-fa'avae auala ole fa'ata'ita'iga tele.

Fautuaga mo le Aveesega masani

1. Fa'amamaina o le Phenol: Fa'aopoopo le voluma tutusa o le 1:1 Phenol/Chloroform ma fa'afefiloi malosi mo le 1-2 minute.Centrifuge i le saoasaoa maualuga mo le 2 minute.Aveese ma le faaeteete le supernatant (80-90%).Aua ne'i o'o i le vaega ogatotonu.O se voluma tutusa o le tali tali e mafai ona faaopoopo i le Phenol/Chloroform ma aveese le supernatant.O supernatants e lua e mafai ona faʻafefiloi faʻatasi mo le faʻafefe o le nucleic acid e faʻaleleia ai le fua.Aua e te agamalu pe a palu, ma aua le taumafai e aveese uma le supernatant.

2. Fufulu i le 70-80% ethanol: I le taimi o le fufuluina, e tatau ona taofi le nucleic acid ina ia mautinoa ua fufulu ese le masima o totoe.I le taimi lava e tasi, i le taimi lava e uma ai ona sasaa ese le ethanol, centrifuge i le saoasaoa maualuga mo ni nai sekone, ona aveese lea o le ethanol totoe ma se paipa.Faʻamavae pe a uma ona tu i le vevela o le potu mo le 5-10 minute.

11. Aveesea o faalapotopotoga faapitoa

1. Fibrous tissue: O le ki i le RNA e aveese mai aano fibrous e pei ole fatu/skeletal muscle o le fa'alavelave atoa lea o le aano.O nei masini e maualalo le tele o sela, o lona uiga o le aofaʻi o le RNA i le iunite mamafa o le tino e maualalo, ma e sili ona faʻaoga le tele o le amataga e mafai ai.Ia mautinoa e olo lelei le aano i lalo ole tulaga malulu.

2. Tisu e maualuga le polotini/ga'o: fai'ai/ga'o fuala'au e maualuga.A maeʻa le faʻaogaina o le PCI, o le supernatant o loʻo i ai fuga paʻepaʻe.E tatau ona toe aveese le supernatant i le chloroform.

3. Tisu e maualuga le nucleic acid/ribozyme content: o le spleen/thymus e maualuga le nucleic acid ma le ribozyme content.O le oloina o aano i lalo o le aisa ma sosoo ai ma le fa'atasi vave e mafai ona fa'agataina ai ribozymes.Ae peitaʻi, afai o le lysate e vaʻavaʻai tele (ona o le maualuga o le nucleic acid content), o le PCI o le a le mafai ona stratify lelei;fa'aopoopo atili lysate e mafai ona fo'ia ai lenei fa'afitauli.E mafai ona aveese e le tele o le PCI le tele o DNA totoe.Afai e vave maua se pa'epa'e pa'epa'e pe a uma ona fa'aopoopo le ava malosi, e ta'u mai ai le fa'aleagaina o le DNA.Toe ave'ese ma le PCI acidic pe a uma ona fa'amavae e mafai ona aveese le fa'aleagaina o DNA.

4. Aano o la'au: E sili atu ona lavelave le aano o la'au nai lo aano o manu.E masani lava, o la'au e eleele i lalo o tulaga o le nitrogen vai, o le mea lea e le masani ai le fa'aleagaina o le RNA e enzymes.Afai e le foia le faʻafitauli faʻaleagaina, e toetoe lava a mafua mai i mea leaga o loʻo i totonu o le faʻataʻitaʻiga.O mea leaga o loʻo i totonu o le tele o laʻau o le a oʻo atu ai i toega, ma o le mafuaʻaga o toega e masani lava ona o nei mea leaga e iai ni mea e tutusa ai ma le RNA: e te faʻafefe ma ou faʻafefe, ma e te faʻafefe ma ou faʻafefe.O nei uiga e iloa ai o latou o ni inhibitors enzyme malosi tele.

I le taimi nei, e mafai ona fetuutuunai fa'atauga RNA fa'atauga fa'apisinisi i le toetoe lava o aano o manu uma e iai ni suiga laiti, ae o lo'o i ai ni nai fa'atauga fa'atau RNA fa'apisinisi e mafai ona fetaui mo le tele o ga'o la'au.O le mea e lelei ai, e mafai e Foregene ona tuʻuina atu faʻapitoapusa RNA fa'ato'aga, e iai sau sikaipiLa'au Aofa'i RNA Isolation pusa, La'au Aofa'i RNA Isolation kit Plus.O le mea mulimuli e faʻapitoa mo laʻau e maualuga le polysaccharide ma le polyphenol.Mo le su'eina o le RNA, o fa'amatalaga mai tagata su'esu'e e sili ona lelei.

12. Le a'afiaga ole fa'aaisa fa'ata'ita'i ma le fa'asa'o O le fa'aaisa fa'ata'ita'iga atonu e lapopoa, ma e mana'omia ona tipi a'o le'i fa'aogaina mo le fa'a'aisa o le RNA.O fa'ata'ita'iga e matele ina liusuavai (atonu o se vaega) a'o tipi.Atonu e mana'omia le fuaina o fa'ata'ita'iga fa'a'aisa a'o le'i 'ave'esea le RNA, ma o le a mautinoa lava le fa'afefeteina i lenei faiga.O nisi taimi, o le fa'afefeteina o le fa'ata'ita'iga e tupu fo'i i le taimi o le fa'agasologa o le fa'amama vai;po'o le fa'a'aisa fa'ata'ita'iga fa'aopoopo sa'o i le lysate e aunoa ma le milling nitrogen vai, ma o le a mautinoa lava le thawing i luma o le homogenization atoatoa.O fa'ata'ita'iga ua fa'aalia ai e sili atu le fa'aleagaina o le RNA i le fa'a'aisa nai lo mea fou.O le mafua'aga fa'apitoa: O le fa'a'aisa-liu fa'aaisa e fa'alavelaveina ai fausaga i totonu o le sela, ma fa'afaigofie ai le fa'afeso'ota'i sa'o o enzymes ma le RNA.

13. Fa'amasinoga ole lelei ole RNA E masani lava, ole electrophoresis e fa'aaoga e fa'amasino ai le fa'amaoni o le RNA, ma le A260/A280 e fa'aaoga e fa'amasino ai le mama o le RNA.I le talitonuga, o le RNA o loʻo i ai le fua faatatau o le 28S: 18S = 2.7: 1, ma o le tele o faʻamaumauga o loʻo faʻamamafaina le fua o le 28S: 18S = 2: 1.O le mea moni e toetoe lava leai se RNA na maua mai faʻataʻitaʻiga e ese mai i sela o loʻo i totonu o le 2: 1 ratio (na maua mai i le Agilent Bioanalyzer).

O taunuuga o le electrophoresis o le RNA e aʻafia i le tele o mea, e aofia ai le fausaga lona lua, tulaga o le electrophoresis, faʻataʻitaʻiga uta, tikeri o le saturation e le EB, ma isi. Faʻaaoga electrophoresis faʻapitoa e iloa ai le RNA ma faʻaoga DNA Marker e fai ma pule.Afai e manino le 28S i le 2kb ma le 18S i le 0.9kb, ma le 28S: 18S> 1, e mafai e le amiosaʻo ona ausia manaʻoga o le tele o suʻega mulimuli ane.

A260/A280 o se fa'ailoga na mafua ai le tele o le le mautonu.Muamua lava, e tatau ona faamanino le uiga muamua o lenei faailoga mo nucleic acids: mama RNA, lona A260/280 = e uiga i 2.0.O le RNA mama o le 'mafuaaga' ma le A260/A280 = 2 o le 'a'afiaga'.O lea la ua fa'aaoga e tagata uma le A260/A280 e fai ma 'mafua'aga, ma le manatu "afai A260/A280 = 2, o lona uiga e mama le RNA", lea e masani ona o'o atu ai i le fenumia'i.

Afai e te fiafia i ai, e mafai ona e faʻaopopoina se mea faʻapitoa e masani ona faʻaaogaina i le faʻaaogaina, e pei o le phenol, guanidine isothiocyanate, PEG, ma isi, i lau faʻataʻitaʻiga RNA, ona fua lea o le fua faatatau A260/A280.O le mea moni o le tele o mea faʻaaogaina mo le faʻaaogaina o le RNA, faʻapea foʻi ma le tele o mea le mama i totonu o le faʻataʻitaʻiga, faʻafefe i le A260 ma le A280, e aʻafia ai le A260 / A280.

O le auala sili ona aoga i le taimi nei o le suʻeina o faʻataʻitaʻiga RNA i le 200-300 nm laina.O le pupuni o le RNA mama o loʻo i ai uiga nei: o le pupuni e lamolemole, A230 ma le A260 o ni mea faʻafefe e lua, A300 e latalata i le 0, A260 / A280 = e tusa ma le 2.0, ma le A260 / A230 = e uiga i le 2.0.Afai e le maua ni fa'amatalaga su'esu'e, e tatau fo'i ona fa'amauina le fua faatatau A260/A230, ona o lenei fua faatatau e sili atu ona maaleale i le feavea'iina o mea leaga uma e a'afia ai le tali enzymatic.Mafaufau i le laina laina o le masini (0.1–0.5 mo A260).

E lua isi mea aoga: o le fua faatatau e tusa ma le 0.3 maualalo pe a fua le A260/A280 i le vai;ae o le fua faatatau e fuaina i le 10 mM EDTA e tusa ma le 0.2 maualuga atu nai lo le fua i le 1 mM EDTA.

oloa fa'atatau:

China Plant Aofa'i RNA Isolation Kit Faumea ma Fa'atau |Foregene (foreivd.com)

RNA vavae fa'asologa Fa'atau ma Falegaosi |Saina RNA fa'aesea fa'asologa Gaosi (foreivd.com)

Fa'asologa fa'aesea RNA - Foregene Co., Ltd. (foreivd.com)