Fautuaga mo le Fa'aleleia atili o le Kelu

1. Faʻateleina le uta faʻataʻitaʻiga i le taimi o le electrophoresis.

2. Fa'aaogā fa'apolopolo eletise fou saunia.

3. Pe a tipi le kelu, taumafai e tipi naʻo le kelu i fasipepa e faʻaitiitia ai le tele o le tipiina o kelu: e le manaʻomia le kelu ma ni nai vaega faʻamoemoega, a leai o le a afaina ai le fua o le toe faʻaleleia.

4. A uma ona liusuavai ni fasi kelu se lua pe sili atu, faaaoga se paipa e tusa lava po o le a le tele o le voluma ma tuu atu i le koluma lava e tasi.

5. O le fofo faʻaopoopo i le sol e mafai ona sili atu, lea e sili atu ona faʻaogaina i le fusifusia o le DNA i le membrane, ae masani lava e le sili atu i le 750ul.

6. O le ki i le toe faʻaleleia o le gel o le fusifusia lea o DNA i le koluma e ala i le faʻaogaina o le masima, acidity (totogi) ma le hydrophobicity o le fofo i le koluma.O le mea lea, afai o le pH o le electrophoresis buffer e maualuga tele, 10ul (pH 5.0, 3mol / L NaAC) e mafai ona faʻaopoopo i le sol;ina ia sili atu ona faʻalavelaveina mole mole DNA i luga o le membrane, e mafai ona faʻaopopo le 30% isopropanol i le vevela i totonu o le vai pe a uma ona faʻamavae le kelu.

7. A'o le'i fa'aopoopoina le eluent, tu'u le koluma i le vevela o le potu mo ni nai minute (pe tusa ma le 10 minute) e fa'a'a uma ai le ethanol.

8. Ma le mea mulimuli, fa'aopoopo le fa'aitiitia o le eluent e fa'aitiitia ai le tele o le toe fa'aleleia.E masani lava, 30-50μl eluent e faʻaaogaina mo le elution (e le laʻititi, a leai o le a le mafai ona susu le membrane, lea e le faʻaogaina i le elution);o le elution droplets o loʻo i le ogatotonu o le membrane, e faʻamalo atoa ai le DNA o loʻo fusifusia i le membrane.

9. A maeʻa ona faʻapipiʻi le eluent, e mafai ona faʻafefe i totonu o le vai taele o le 55 tikeri mo le 5 minute pe tuʻu i totonu o le vai taele o le 50 tikeri mo le sili atu i le 10 minute, pe faʻamaufaʻailogaina i se parafilm i le 4 tikeri i le po, ona centrifuged lea mo le toe faʻaleleia i le aso e sosoo ai, e lelei le aafiaga.

10. Fa'aopoopo le eluate centrifuged i tua i le adsorption koluma ma toe centrifuge.

Auiliili metotia ma faiga mo le toe faʻaleleia o oloa PCR

1. Toe fa'aaogaina pa'u masani

Afai e te manaʻo e toe faʻaleleia le kelu, e sili ona lelei le faʻaaogaina o se pusa, lea e faigofie ma e sili atu le maualuga o le toe faʻaleleia.Afai e te manaʻomia moni e toe faʻaleleia ma le lima, e mafai ona e faʻaopoopoina faʻatolu le tele o le TE pe a uma ona tipiina le kelu.A mae'a ona liusuavai i totonu o le vai ta'ele, phenol, phenol/chloroform e aveese mama, ma fa'afefete le ethanol.O lena lava.

2. Toe faʻaleleia DNA mai gels maualalo maualalo

Faʻamamāina o fasipepa DNA Faʻaopoopo le TE (10 mmol / l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol / l EDTA) tutusa ma le voluma o le gel, ma tuʻu i totonu o le vai taele 65 ° C mo le 5 minute e faʻamavae atoa ai le gel.

Ina ua uma ona aumai i le vevela o le potu, o se aofaiga tutusa o le phenol (tumu i le TE, TE sa faamaufaailogaina i le vaega pito i luga, ma le vaega pito i lalo o le phenol ua faaopoopo) ma faʻafefiloi malie le paluga (leai se faʻafefiloi e manaʻomia), ma centrifuged i le 12,000 rpm mo le 3 minute.Toe fai 1-2 taimi.

Ave le supernatant, fa'aopopo le 0.1 voluma o le 3mol/L sodium acetate (pH 5.2) ma le 2.5 taimi le voluma o le ethanol atoatoa e fa'atino ai le fa'afefe o le ethanol.Fa'amavae le DNA fa'amama ma se aofa'i talafeagai o le TE, fua le anotusi, ma sauni mo le fa'aoga (e mafai ona fa'aoga mo su'esu'ega o le fa'atulagaina o kenera, sauniuniga su'esu'e, ma isi).

3. Toe faʻaleleia PCR faʻatasi ma faʻapitoa faʻapipiʻi lelei

Afai e lelei le faʻapitoa o le PCR amplification, e naʻo se faʻamamaina faigofie ma le toe faʻaleleia o le oloa PCR.E mafai ona e fa'aopoopoina le 50ug/ml proteinase K i le oloa PCR, 37 tikeri mo le 1h, ave fa'atasi ma le phenol/chloroform, fa'atasi ma le chloroform, ma fa'aopoopo le 0.1 voluma o le supernatant.O le sodium acetate na toe maua e ala i timuga ma le 2.5 voluma o le ethanol atoatoa.

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