O le RNase o se upu ma'ale'ale e le fia fa'alogo i ai le to'atele o tamaiti a'oga e masani ona fa'atino su'ega RNA.Fa'aauupegaina atoatoa, o le RNA lea na i'u lava ina maua mai ma fa'ama'i fa'ato'a sili ona oona o le phenol ma le chloroform na fa'aleagaina.Ou te le toe faalelei!!!I aso nei, sei o tatou tilotilo i le amataga o le lauiloa Rnase.

Ribonuclease (RNase), poʻo RNase, o se nuclease e mafai ona faʻafefeteina le RNA i ni molelaʻau laiti.RNase, e pei o se polotini mole laʻititi, e tulaga ese le mautu .O le vevela maualuga masani ma le faʻamaʻiina o le ausa maualuga ma le iniseti polotini e le mafai ona faʻagata atoatoa.O le mautu o le RNase e masani lava ona sau mai faʻamaufaʻailoga disulfide i totonu o le fausaga.Mo se faʻataʻitaʻiga, o le RNase e masani ona faʻaaogaina o le pancreas bovine e naʻo le 124 amino acids, ae o loʻo i ai le 4 disulfide bonds.O le Sulfur bond ma le disulfide bond e maua ai le RNase ma le mautu mafanafana lelei.E le gata i lea, o le rnase e laʻititi laʻititi le mamafa mole mole ma e mafai ona vave faʻafoʻisia lona faʻasologa muamua i le tele o tulaga.

E le gata i le matua mautu,O RNases o lo'o i soo se mea i totonu ole falesuesue .O le RNase o se masini puipuia o meaola.Mo se sela, o le RNA i fafo e masani ona oti.Pe a faʻatusatusa i le DNA faʻapitoa, o le RNA faʻapitoa e masani ona sili atu ona mataʻutia.O le RNA o loʻo faʻasalalau fiafia ma faʻaliliu, o lea e toetoe lava o meaola uma na faʻatupuina RNases e puipuia mai le osofaʻiga a le RNA mai fafo.O le mea lea, o sela siama na totoina i totonu o le fale suʻesuʻe ma oe o loʻo aumaia le RNA e faʻaalia le manogi o le RNase.Ole sua ole tino ole tagata (faua, loimata, ma isi) o lo'o iai le tele o le RNase, o lea aua le tagi pe a fa'aleagaina le RNA.O le tele o lou tagi, o le leaga foi lea o le faʻaleagaina o le RNA!!E le fetaui Tuafafine Daiyu mo le su'eina o le RNA!

E le gata i lea, o lou paʻu maʻaleʻale o loʻo i ai foi le tele o RNase, ma o faʻailoga, paipa, faitotoʻa pusaaisa, ma 'au o faitotoʻa na paʻi i ai le paʻu o loʻo iai foʻi le RNase.

Faatasi ai ma le tele o faʻalavelave, seʻi o tatou vaʻavaʻai pe faʻafefea ona taulimaina RNases.

O le mea muamua e mafaufau i ai tagata uma pe a aveese le RNADEPC(diethyl pyrocarbonate).O le DEPC e masani lava ona faʻaumatia le polotini e ala i le tuʻufaʻatasia ma le mama imidazole o le histidine vaega malosi RNase, ma faʻafefe ai le gaioiga o le enzyme.0.1% DEPC e mafai ona i ai se aafiaga sili atu ona aveese i luga o le Rnase, ae e tatau ona tatou gauai atu o le DEPC o se carcinogen lauiloa, o lea e tatau ai ona totogi faʻapitoa pe a faʻaaogaina.

Mo RNase, e tatau ona tatou amata mai vaega e lua,muamua o le faʻalavelaveina o le gaioiga o le RNase endogenous

O mea faʻapitoa e faʻaaogaina RNA e pei o le guanidine isothiocyanate ma le DTT o loʻo i totonu o Trizol e mafai ona tatalaina le faʻamaufaʻailoga disulfide o RNase, ae o loʻo i ai pea nisi RNases, aemaise lava i faʻataʻitaʻiga o mea, o lea ia gauai atu i le maualalo o le vevela.

1.Fa'ato'ato'a fa'atofu le fa'ata'ita'iga o mea'ai i totonu o le fa'asusu vai pe'ā uma ona ave i fafo, po'o se vaifofo fa'asao RNA faapisinisi.

2.A maeʻa ona suʻeina le RNA o le faʻataʻitaʻiga sela, faʻaopopo i le vaifofo lysis ma faʻasaʻo i luga o le pusa aisa.

3. E sili ona lelei le faʻaogaina o le nitrogen vai mo le oloina pe'a fa'ameamea fa'ameamea.Pe a faʻaaogaina se homogenizer eletise e aunoa ma le faʻaogaina o le nitrogen, faʻalogo lelei i le faʻamaluluina atoa o le mea faʻapipiʻi homogenate.

O le lona lua ole DNase fa'apitoa

1.Ia faaauupegaina atoatoa, fai se ofu talaloa, fai se matapulepule, ma ia mautinoa e fai se pea o totigilima fou (aua le soona faʻatau!! E tatau ona maitauina o le Trizol e sili ona pala, ma e malosi tele foi i totigilima, o lea aua le faʻafefe i ou lima).

2.O faʻamatalaga uma o paipa faʻaaoga, paipa EP, paipa PCR ma isi mea faigaluega e tatau ona togafitia le RNase.E mafai ona fa'asusu i le 0.1% DEPC ona fa'amalosi lea i lalo o le mamafa.Fa'alogo lelei i le fa'agaioiga i totonu o se pusa asu.E mafai ona fa'atau sa'o e le au fa'apitonu'u mea e fa'aaoga mo le aveesea o enzymes.

PS: Se'i ou ta'u atu ia te oe se auala paie.E ui o le maualuga o le vevela ma le maualuga o le mamafa e le mafai ona aveese atoa le RNase, o le a aveesea ai se vaega tele.2 taimi o le maualuga o le vevela ma le maualuga o le mamafa o loʻo i ai se aafiaga lelei, ma o le aveeseina o le RNA e itiiti sona aoga.

3.E mafai e le ava malosi ona fa'amuta polotini,o lea e mafai ai ona solo le laulau RNA extracts i le 75% ava malosi , ma totigilima e mafai foi ona sausauina i le ava malosi.

4.Ole vaifofo fa'amuta fa'ai'u ole RNA ma le fa'au'au fa'acentrifuge e tatau fo'i ona togafitia ile RNase.O le vai DEPC o se vaifofo fa'amavae masani a le RNA.Sei o tatou talanoa e uiga i le auala sa'o tapenaga ole vai DEPC (manatua e toe fa'apipi'i le DEPC fa'apisinisi pe ae fa'atau)

Faʻaopoopo le DEPC i le vai mama i le 1: 1000, lulu lelei, tuʻu i le po i le 37 ° C, ma faʻamaʻi i le 121 ° C i lalo o le vevela maualuga ma le maualuga o le mamafa mo le 15 minute.E mafai ona teuina le vai DEPC ile -20°C ile 1ml aliquots.

Ma le mea mulimuli, i le aotelega: maualalo le vevela o le ki, mea'ai e fa'aaogaina lelei, fa'aauupegaina atoatoa ma itiiti le tautala!

Ia, o le mea lena mo le fuafuaga o lenei aso.Ou te manaʻo ia te oe uma le faʻaogaina o le RNA ma le mama na e taʻua.A260/A280 uma e 2.0!!!

Ioe, afai e te faʻaaogaina sefa'agaioiga vevela potu RNA pu'e fa'atosina, atonu e te le fetaiai ma faafitauli o loo i luga.

Fa'agaioiga i le vevela o le potu, e aunoa ma le fa'aopoopoina o le DNase, e to'esea ai le RNA atoa mai sela i totonu o le 11 minute, ma aveese le RNA atoa mai aano o manu po'o la'au i le 30 minute.

Mo fa'ata'ita'iga fa'ata'ita'iga, fa'amolemole fa'afeso'ota'i:overseas@foregene.com

Oloa Fa'atatau:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/