O le a le tui mRNA
O le tui mRNA e tuʻuina atu le RNA i sela o le tino e faʻaalia ma gaosia ai antigens protein pe a maeʻa suiga talafeagai i le in vitro, ma taʻitaʻia ai le tino e maua ai se tali puipuia e faasaga i le antigen, ma faʻalauteleina ai le malosi o le tino.[1,3].
Ata 1: Ata fa'ata'atia o le a'afiaga ole tui tu'u sa'o ole tui mRNA [2]
Fa'avasegaina o tui mRNA
Ua vaevaeina tui mRNA i ituaiga e lua:e le toe faiamRNA mafa'alolotoina e le tagata lava iamRNA: le mRNA fa'atupuina e le tagata lava ia e le gata ina fa'apipi'iina le antigen fa'amoemoe, ae fa'apena fo'i le fa'asologa e mafai ai ona fa'auluina le RNA intracellular ma le fa'aogaina o le porotini.O tui mRNA e le mafai ona toe faia na'o le fa'aogaina o antigens ma e iai le 5'ma le 3'untranslated regions (UTR).Latou te tuʻuina atu faʻamalositino atoatoa o le fetuutuunai ma le puipuiga faʻapitoa, e taʻua i le faʻaaliga o le antigen faʻaalia ma le faʻasalalau faʻailoga mataʻutia, ma maua ai faʻaoga nei.[2,3]
●E mafai ona tuʻuina atu faʻamalosi atoatoa o le fetuunaʻi ma le puipuiga faʻanatura, e taʻua i totonu o le faʻaaliga antigen faʻaalia ma le faʻasalalau faʻailoga matautia
●E mafai ona fa'aosoina le "paleni" tali fa'aleaogaina, e aofia ai fa'amasani ma fa'aola feavea'i ma manatua fa'aletonu
●E mafai ona tuʻufaʻatasia antigens eseese e aunoa ma le faʻateleina o le lavelave o le faia o tui
●Fa'aauau le fa'aleleia atili o le puipuiga e mafai ona maua e ala i tui fa'aauau, ma e leai pe itiiti fo'i le tali atu i le va'a.
●O tui mRNA mautu vevela e mafai ona faafaigofie le felauaiga ma le teuina o tui
Ata 2: Ata fa'ata'atia o le tui mRNA ma lona fa'aogaina o le antigen [4]
Ituaiga o tui mRNA
Pe a fa'atusatusa i tui fa'aleaganu'u, o tui mRNA e faigofie ona gaosia, fa'avavevave le atina'e, leai se mana'oga mo le aganu'u, ma tau maualalo.Pe a faatusatusa i tui DNA, o tui mRNA e le manaʻomia ona ulufale i totonu o le nucleus ma e leai se lamatiaga o le tuʻufaʻatasia i le genome talimalo.O le afa-ola e mafai ona fetuunai e ala i suiga.
Laulau 1: Itu lelei ma le le lelei o tui mRNA
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| Fa'amanuiaga | Fa'aletonu |
| tui mRNA | Ole vave su'esu'e ma atina'e, ole gaosiga ole tui e na'o le 40 aso | Fa'aoso se tali fa'aletonu le talafeagai
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| mRNA le mautu i lalo o tulaga physiological, faigofie ona faʻaleagaina | O le a le tu'ufa'atasia i le genome e aloese ai mai suiga fa'afoma'i
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| Leai se mana'omia mo so'o se fa'ailoga fa'ainisinia, fa'aliliuga | O le aoga o le saogalemu faaniukilia e tumau pea ona faʻamaonia
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Ata 3: Siata fa'asolo ole gaosiga ma tapenaga ole tui mRNA [4]
Foregene Viral RNA Isolation kit
RT-qPCR Faigofie (Tasi Laasaga)
Fa'aleleia ta'iala mo le saunia o tui mRNA
Ona o le le lelei o le mautu o le mRNA lava ia, faigofie faʻaleagaina e nucleases i totonu o masini, maualalo le faʻaogaina o sela, ma maualalo le faʻaliliuga lelei, o nei faaletonu e faʻatapulaʻa ai le faʻaogaina o tui mRNA.E iai fo'i se sao taua tele le fa'aliliuga lelei.E mafai ona vaevaeina taʻavale tilivaina i viral vectors ma mea e le o ni viral (e aofia ai liposomes, non-liposomes, viruses, nanoparticles, ma isi).O le mea lea, e mana'omia ni faiga fa'aleleia talafeagai.O lo'o i lalo se ta'iala mo le fa'aleleia atili o vaila'au mo le sauniuniga mRNA[2]
1 Fa'amaopoopo fa'aigoa tapuni po'o le fa'aogaina o enzymes tapuni e fa'amautu ai le mRNA ma fa'ateleina le fa'aliliuga porotini e ala i le fusifusia i le fa'aliliuga eukaryotic initiation factor 4E (EIF4E)
2 Fetuunai elemene i le 5′-untranslated region (UTR) ma le 3′-UTR e faʻamautu ai le mRNA ma faʻateleina le faʻaliliuga o porotini.
3 Fa'aopoopoina Poly(A) si'usi'u e mafai ona fa'amautu le mRNA ma fa'ateleina le fa'aliliuga porotini
4 Suia nucleosides e fa'aitiitia ai le fa'agaioiina o le puipuiga ma fa'ateleina le fa'aliliuga
5 Togafitiga faʻatasi ma le RNase III ma le faʻamamaina o le chromatography vai (FPLC) vave e mafai ona faʻaitiitia ai le faʻamalosia o le puipuiga ma faʻateleina le faaliliuga
6 Fa'alelei fa'asologa po'o codons e fa'atele ai le fa'aliliuga
7 Fa'asoa fa'atasi o fa'aliliuga amata ma isi auala e sui ai le fa'aliliuga ma le immunogenicity
Ata 4: In vitro transcription (IVT) mRNA gaosiga ma faʻagasologa faʻapotopotoga [5]
Sauniuniga tetele ole DNA plasmid
O le fa'amamāina o le DNA Plasmid e tele lava ina fa'ate'aina mea leaga e pei o le RNA, DNA endotoxin tatala-li'o, polotini talimalo ma le nucleic acid, ma e masani ona liua le plasmid recombinant i le E. coli.O le E. coli e o'o i le fa'afefeteina maualuga, ona vavae'ese ai lea o le sua-suavai, ma le aoina o le E. coli.O le E. coli o loʻo tuʻuina atu i le alkaline lysis, centrifugal solid-liquid separation ma microfiltration clarification pe a uma le lysis, ultrafiltration ma le faʻamalosi pe a uma le faʻamalamalamaga, ona faʻamamaina ai lea o le chromatographic.
Faʻamamaina ole DNA plasmid:
Foregene General Plasmid Mini Kit
【1】苗鹤凡, 郭勇, 江新香.mRNA疫苗研究进展及挑战[J].免疫学杂志, 2016(05):446-449.
【2】Pardi N, Hogan MJ, Porter FW, ma isi.tui mRNA - o se vaitau fou i tui puipuia [J].Natura Iloiloga Fualaau Fa'asaina, 2018.
【3】Kramps T., Elbers K. (2017) Folasaga i RNA Vaccines.I: Kramps T., Elbers K. (eds) RNA Vaccines.Methods in Molecular Biology, vol 1499. Humana Press, Niu Ioka, NY.
【4】Maruggi G , Zhang C , Li J , et al.mRNA e avea o se Tekinolosi Transformative mo le Atinaʻeina o tui e pulea ai faʻamaʻi pipisi[J].Togafitiga Molecular, 2019.
【5】Sergio Linares-Fernández, Céline Lacroix, , Su'iina le tui mRNA e Paleni ai le Fa'asaienisi/Adaptive Immune Tali, Trends i Molecular Medicine, Volume 26, Lomiga 3,2020, Itulau 311-323.
Taimi meli: Aukuso-05-2021
