E le mafai e faʻasologa faʻasolosolo faʻaleaganuʻu ona faʻafeiloaʻi le maualuga o le vevela (o le vevela sili ona lelei mo gaioiga MMLV o le 37-50 ° C, ma le AMV o le 42-60 ° C).Le sili atu lavelave viral RNA e le mafai ona toe faʻaliliu lelei i le cDNA i le maualalo o le vevela, e mafua ai le faʻamaonia lelei Le faʻaitiitia.O le RT-qPCR masani e masani ona manaʻomia le auai o enzymes autu e lua (reverse transcriptase ma DNA polymerase), lea e le mafai ai ona faʻafaigofie le faʻaogaina o le faiga faʻaalia ma faʻaitiitia le tau.O iinei o le a matou faʻalauiloa atu ai faʻamatalaga faʻaliliuga e lua e maualuga le vevela, TtH ma RevTaq.O nei enzymes e lua o loʻo i ai foi le aoga ole DNA polymerase, o lea e taʻua ai enzymes bifunctional.

TtH DNA polymerase

Masalo na e fa'alogo e uiga i le TtH, lea e maua mai le siama thermophilic Thermus thermophilus HB8.I le i ai o cation divalent e pei o le Mg2 +, o loʻo i ai le DNA polymerase gaioiga.E masani ona faʻaaogaina i PCR reactions e pei o le Taq enzyme, ae e maualuga atu le vevela nai lo le Taq enzyme, o lea e sili atu lona aafiaga ile PCR ma faʻataʻitaʻiga maualuga GC.

· O lenei enzyme e leai se 3′→5′ exonuclease activity ma le 5′→3′ exonuclease activity, o lea e mafai foʻi ona faʻaaogaina mo le faʻasologa o dideoxy.

· O lenei enzyme e iai le gaioiga o le RTase.I le i ai o le Mn2 +, o le a faʻaleleia le gaioiga o le RTase.O le fa'aogaina o lenei vaega, e mafai ona fa'aogaina e fa'atino ai le fa'aliliuina o fa'aliliuga fa'aliliuga ma le tali atu o le PCR i le fa'alava lava e tasi, o lona uiga, tasi le la'asaga RT-PCR.Ae ui i lea, i le i ai o le Mn2 +, o le saʻo o le RT-PCR e le maualuga.Ole gaioioiga RT e leai se mea e fai ile rnaase H gaioiga.

· O le faʻateleina o gaioiga o le Tth-DNA polymerase (pH9, sili ona lelei + 55 ℃～ + 70 ℃, maualuga + 95 ℃) faʻatoʻilaloina faʻafitauli e mafua mai i le fausaga lona lua o le RNA.O le cDNA e maua mai e mafai ona faʻateleina e le PCR ma le enzyme tutusa i le i ai o Mg2+ ion.

· O le gafatia o le Tth-DNA polymerase e fa'atino ai le fa'aliliuga fa'aliliu ma le fa'alauteleina o le DNA i le vevela maualuga e fa'aoga ai lenei enzyme mo le fa'atusatusaina o le RT-PCR, fa'atosina, ma su'esu'ega fa'amatalaga o le RNA cellular ma viral.
· Tth-DNA polymerase e faʻaaogaina mo le RT-PCR e faʻateleina le RNA e oʻo atu i le 1kb.

Fa'ailoga ma mea lelei

Tth DNA polymerase:

• Ia fa'amautinoa le fa'asiliina o le tele o mea fa'aola polymerase chain reaction (PCR), ia le itiiti ifo i le 1000 bp ile RT-PCR reaction.

• Talia le deoxyribonucleoside triphosphate ua suia e fai ma sui

• E le feso'ota'i ma le RNase H gaioiga

• E maualuga le mautu o le vevela e foia ai faʻafitauli, e masani ona fesoʻotaʻi ma le fausaga maualuga maualuga o loʻo i ai i le RNA

RevTaq RT-PCR DNA polymerase

O se DNA polymerase e fa'asa'o vevela fa'atasi ai ma gaioiga fa'aliliu fa'aliliu

RevTaq-RT-PCR-DNA polymerase ose fa'ainisinia, e maualuga le vevela, fa'aoga lua enzyme fa'atasi ma fa'aliliuga fa'aliliu ma DNA polymerase gaioiga e maua mai i le fa'atonuga ma le fa'afoliga fa'atupu.

· Ole afa ole ola ole RevTaq RT-PCR DNA polymerase ile 95°C e sili atu ile 40 minute.

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase e mafai ai ona fa'aliliu sa'o mai le fa'ata'ita'iga o le RNA, ma o le la'asaga fa'aliliu e mafai ona toe fai fa'atele e fa'atupu atili ai ata cDNA.

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase e mafai ai e le "zero-step" RT-PCR (leai se isothermal reverse transcription step), aua i le cyclic PCR extension step, faʻasolosolo faʻaliliuga ma DNA faʻalauteleina e tupu i le taimi e tasi.E fa'apena fo'i ona fa'atupuina le fa'aliliuga fa'aliliuga i le vevela maualuga, ma fa'aitiitia ai fa'afitauli e feagai ma le fa'afefeteina o le fausaga lona lua malosi i le RNA i le maualuga o le vevela.

· Ona o le aptamer-based hot-start formula, RevTaq RT-PCR DNA polymerase o le a maua ai ni taunuuga sili atu pe a maualuga atu le vevela ma le faʻalauteleina o le vevela nai lo le 57°C.

· Talu ai ona o le enzyme e tete'e i le vevela, e fautuaina e fa'ata'ita'i fa'amaufa'ailoga ma su'esu'ega e maualuga tele le liusuavai (>60°C).

· E fautuaina e fa'amalieina le vevela ole la'asaga fa'apipi'i/fa'aopoopo e ala ile fa'alili ole vevela ile taimi ole fa'atulagaina o tali.

· O le maualuga o le vevela, o le maualuga o le faʻapitoa o le PCR.O le fa'asologa o fa'aliliuga fa'asolosolo e masani lava ona fa'atino i se vevela maualuga atu nai lo le ta'amilosaga o le PCR, aua o le DNA Primer:RNA Template hybridization e masani lava ona maualuga atu le liusua'i nai lo le DNA Primer:cDNA Template duplex.

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase o lo'o fa'ainisinia ma fa'atumauina, ma o le tele o le amplicon e i le va o le 60-300 bp.

RevTaq RT-PCR DNA polymerase fa'atapula'aina e o'o atu ile 4 kopi/

O lo'o fa'aalia i le fa'atusa le faiga fa'asili (o le fa'atūina o fa'ameamea fa'afefeteina maualuga).RevTaq RT-PCR DNA polymerase-driven RT-PCR e sili atu le maaleale nai lo le TaqPath 1-step RT-qPCR master mix, ma le maualalo o le iloa Fa'ata'ita'iga fa'afefete fa'afefete.

E sili atu mea lelei:

Galuega amata vave → E mafai ona faase'e le laasaga muamua o le denaturation vevela.

Fuafua aptamer amata vevela → Tuuina atu le 100% gaioiga enzyme vave ma puipuia le faʻalauteleina e le faʻapitoa i le maualalo o le vevela (<57°C).

Galuega fa'amama → O le la'asaga o le RNA e fa'ate'aina ua fa'ate'aina, ona o le RevTaq RT-PCR DNA polymerase e mafai fo'i ona fa'agasolo fa'ata'ita'iga fa'ata'ita'i.E mafai ona vave faʻaumatia le sela sela o eukaryotes, siama ma siama i se vevela RT-PCR taamilosaga.

IVD tulaga mata'utia → tulaga maualuga maualuga ma tau fa'atauva'a