Talu ai nei, na ou mauaina ai se mea ofoofogia!O le tele o fa'apolofesa fa'ata'ita'iga fa'apitoa o lo'o siomia ai o ia latou te le'i iloa ni fa'amatalaga fa'ata'ita'iga fa'apitoa.

Mo se faʻataʻitaʻiga, e mafai ona e taliina fesili nei?

E i ai se eseesega i le va o le OD260 ma le A260?O le a le uiga o ia mea taitasi?
OD o le faʻapuʻupuʻu o le optical density (optical density), A o le faʻapuʻupuʻu o le absorbance (absorbance), o manatu e lua e tutusa lava, "optic density" o le "absorbance", ae o le "optical density" e ogatasi ma le tele o tulaga faʻale-atunuu ma sili atu faʻasalalau.

E masani ona matou fuaina le tau o le OD i le 260nm e faʻatatau ai le faʻaogaina o le nucleic acid, o le a le mea o loʻo faʻatusalia e le 1OD?
O le nucleic acid o loʻo i ai le maualuga maualuga o le absorption i le galu o le 260nm, lea e aofia uma ai le DNA ma le RNA, faʻapea foʻi ma vaega o le nucleic acid fragmented (o le mea autu lea).
O le tau o le OD na fuaina i le galu o le 260 nm na faamaumauina o le OD260.Afai e mama le faʻataʻitaʻiga, o le tau OD260 e mafai ona faʻatusatusa le faʻaogaina o le faʻataʻitaʻiga o le nucleic acid.
1 OD260=50 μg/ml dsDNA (DNA fa'afa'alua)
=37 μg/ml ssDNA (DNA fa'afua tasi)
=40 μg/ml RNA
=30 μg/ml dNTPs (oligonucleotides)
E i ai se feso'ota'iga ma se eseesega i le va o le RT-PCR, Realtime-PCR ma le QPCR?
RT-PCR e pu'upu'u mo Reverse Transcription PCR
PCR Taimi Moni=qPCR, faapuupuu mo le Quantitative Real Time PCR
E ui lava o le PCR Taimi Moni (PCR fa'alili ole taimi moni) ma le Reverse Transcription PCR (reverse transcription PCR) e foliga mai e fa'apu'upu'u o le RT-PCR.Ae o le fa'asalalauga fa'avaomalo o le: RT-PCR e fa'asino tonu i le fa'aliliuina o le PCR.

O a nt, bp, ma kb e masani ona fa'aoga e fa'amatala ai le umi ole DNA/RNA ile biology?
nt = nucleotide
bp = taitoalua faavae taitoalua faavae
kb = kilobase

Ioe, e te fai mai e toʻatele tagata e le popole i nei faʻamatalaga laiti!E faia e tagata uma lenei mea, ma e leai se tasi e fesili atu ia te oe po o le a.E te iloa e le manaʻomia lenei mea, saʻo?

Leai, Leai, Leai, e matua tatau lava ona iloa lenei mea!ona o le fea?
Ona e te manaʻo e faʻasalalau se tusiga!Tuagane!Pe o e faʻamoemoe mo le faʻauʻuga poʻo le tulituliloaina o taunuʻuga suʻesuʻega faasaienisi, e tatau ona e faʻalagolago i tala e tautala ai!

O le su'eina o le nucleic acid e tatau ona fai ma fa'ata'ita'iga sili ona faigofie.O le lelei o le su'eina o le nucleic acid e fuafua tonu ai taunuuga o su'esu'ega mulimuli ane.

E ui ina ou fai atu i le tele o taimi, ae o loo i ai pea le tele o uo e le popole.O le taimi lea na ou filifili ai e alu ese mai le tusiga!

Fa'amatalaga aupito maualalo mo le fa'asalalauina o fa'ata'ita'iga a le PCR taimi moni, e ta'ua o le MIQE, o se seti o taʻiala faʻataʻitaʻiga faʻataʻitaʻiga faʻasalalau faʻasalalau faʻavaomalo, lea e tuʻuina atu tulaga maualalo mo faʻamatalaga faʻataʻitaʻiga e manaʻomia mo le iloiloina o suʻesuʻega PCR faʻataʻitaʻi ma le lolomiina o tala.E ala i tulaga faʻataʻitaʻiga ma metotia auʻiliʻili na tuʻuina atu e le tagata suʻesuʻe, e mafai e le au suʻesuʻe ona sili atu le iloiloina o le faʻamaonia o le faʻataʻitaʻiga a le tagata suʻesuʻe.

E mafai ona iloa i le vaega o le suʻeina o le nucleic acid, o mea nei e iloa ai ua faʻatulagaina,

“E” o lo'o fa'aalia ai fa'amatalaga e tatau ona tu'uina atu ma le "D" o lo'o fa'aalia ai fa'amatalaga e tatau ona tu'uina atu pe a mana'omia.

O le fomu e matua faigata lava, o le mea moni, ou te fia fai atu e tatau i tagata uma ona amata mai

mama (D), fua (D), amiosa'o (E) ma le tumau (E) e iloilo Nucleic acids i nei vaega e fa.

E tusa ai ma masaniga faʻataʻitaʻiga, muamua talanoa e uiga i metotia iloiloga o le mama ma le faʻatonuga.

Ole fua ole OD ole auala sili ona fiafia ma faigofie ile su'esu'ega.Ae mo le mataupu faavae, o le a ou le alu i auiliiliga iinei.Ole tele o fale su'esu'e ua fa'aogaina nei ultra-micro spectrophotometers e su'esu'e sa'o ai fa'ata'ita'iga fa'ata'ita'iga nucleic acid.A'o fa'aalia le tau o le absorbance, e tu'u sa'o mai e le polokalame le tau o le fa'atonuga (nucleic acid, porotini ma le lanu felanulanua'i) ma fua faatatau.A'o le au'ili'iliga o le tau o le OD, Fa'asao le ata lea ma e lelei.

Lisi fofo tau aogā lautele OD

Ae ui i lea, o loʻo i ai nai faʻamatalaga e manaʻomia ona tuʻu ese mai mo oe.

(A uma mea uma, ou te iloa e tatau ona avea oe ma tagata e teu tupe ma faʻatali seʻia e manaʻomia!)

Fa'amatalaga 1 Meafaigaluega

Ole tau ole OD ole a a'afia ile masini eseese.Afai o le OD260 o loʻo i totonu o se vaega patino, o tau o OD230 ma OD280 e taua.Mo se faʻataʻitaʻiga, o le absorbance range o le masani Eppendorf D30 i le 260nm o le 0 ~ 3A, ma le NanoDrop One of Thermo o loʻo i le 260nm.Ole vaega ole absorbance ole 0.5~62.5A.

Fa'amatalaga 2Reagent dilution

O le tau o le OD e mafai ona aʻafia i le faʻafefeteina o reagents eseese.Mo se faʻataʻitaʻiga, o le OD260/280 faitauga o le RNA mama i le pH7.5 10mM Trispa puipui i le va o le 1.9-2.1, a'o totonuvai fa'aitu'ule fua faatatau o le a maualalo, atonu na o le 1.8-2.0, ae e le o lona uiga o le lelei o le RNA suia Eseesega.

Fa'amatalaga 3O mea o totoe

O le i ai o mea totoe o le a aʻafia ai le saʻo o le fua o le faʻaogaina o le nucleic acid, o lea e tatau ai ona aloese mai le palatini, phenol, polysaccharide ma polyphenol toega i faʻataʻitaʻiga nucleic acid i le tele e mafai ai.

Ae ui i lea, o le mea moni, o le faʻaaogaina faʻatasi ai ma reagents organic o se auala tuai.I pusa faʻatau, e mafai ona maua le aafiaga o le faʻaaogaina e ala i se koluma adsorption faʻavae silica faʻatasi ma le centrifugation, aloese mai vailaʻau oona ma faʻaleagaina e faigata ona aveese, ma isi. O le faʻafitauli, e pei o leForegene's nucleic acid extraction kit, e le fa'aogaina le DNase/RNase ma vaila'au oona i le taimi atoa o le taotoga, vave ma saogalemu., ma leaafiaga olelei(faafuaseʻi ona fai mai e tula, ae ou te iloa e te fia iloa).

Fa'ata'ita'iga 1: Genomic DNA e maua mai ma le mama

Foregene Soil DNA Isolation Kit (DE-05511) e togafitia faʻataʻitaʻiga o le eleele mai punaoa eseese, ma o le aofaʻi ma le mama o le genomic DNA na maua o loʻo faʻaalia i le laulau o loʻo i lalo:
Fa'ata'ita'iga 2: Tissue RNA maua mai ma mama

Animal Total RNA Isolation Kit (RE-03012) na fa'agaioia fa'ata'ita'iga o mea'ai, ma o le aofa'i ma le mama o le RNA na maua o lo'o fa'aalia i le laulau o lo'o i lalo (mo le aano o isumu):
Ae ui i lea, aua e te manatu ua maeʻa oe ile tau ole OD.E i ai sau fa'atonuga o manatu autu na ou tusia mo oe i luma?

Fa'aaliga

O molelaula nucleic acid ua vaevaeina o le a fuafua foi i le mitiia.Fa'apea o lo'o iai sau DNA genomic i le RNA, o le a foliga mai e maualuga tele lou tau o le OD, ae e le mafai ona fa'amauina le fa'atonuga moni o le RNA.Pe o lau RNA E le o manino pe o loʻo i ai le faʻaleagaina, o lea matou te manaʻomia pea se metotia iloiloga atoatoa e tuʻuina atu ai se faʻamasinoga saʻo, o lona uiga, o le suʻesuʻeina o le faʻamaoni o le nucleic acid o loʻo taʻua i le MIQE.