O le PCR (polymerase chain reaction) o se tasi lea o fa'atekonolosi fa'alautele DNA in-vitro, ma se tala fa'asolopito e silia ma le 30 tausaga.

O tekonolosi PCR na paionia e Kary Mullis o Cetus, ISA i le 1983. Na talosaga Mullis mo se pateni PCR i le 1985 ma lomia le uluai PCR pepa aʻoaʻoga i le Saienisi i le tausaga lava lea.Mullis na maua le Nobel Prize in chemistry i le 1993 mo lana galuega.

Mataupu Faavae Autu ole PCR

E mafai e le PCR ona faʻalauteleina vaega o le DNA e sili atu ma le tasi miliona taimi.O le mataupu faavae o loʻo i lalo ole faʻataʻitaʻiga ole DNA polymerase, e faʻaaoga ai matua matua DNA e fai ma faʻataʻitaʻiga ma faʻamatalaga faʻapitoa e fai ma amataga mo le faʻaopoopoga.E toe faia i vitro e ala i laasaga e pei o le denaturation, annealing, ma le faʻaopoopoga.Le fa'agasologa o le tama'i tama'i pipi DNA e fa'atasi ma le matua fa'ata'ita'iga DNA.

O le faiga masani PCR ua vaevaeina i ni laasaga se tolu:

1.Denaturation: Fa'aoga le vevela maualuga e tu'u'ese'ese ai fusi fa'alua DNA.O le hydrogen so'oga i le va o le DNA e lua ua motusia ile vevela maualuga (93-98℃).

2. Annealing: A maeʻa ona vavae ese le DNA faʻalua, faʻaititia le vevela ina ia mafai ai e le primer ona fusifusia i le DNA tasi.

3. Fa'aopoopoga: O le DNA polymerase e amata ona fa'apipi'i fa'atasi fa'atasi i luga ole la'au DNA mai fa'amaufa'ailoga e fusia pe a fa'aitiitia le vevela.A maeʻa le faʻaopoopoga, e maeʻa le taamilosaga, ma faʻaluaina le numera o vaega DNA

O le toe faia o nei laasaga e tolu 25-35 taimi, o le numera o vaega DNA o le a faʻateleina faʻateleina.

O le atamai o le PCR e mafai ona mamanuina faʻamatalaga eseese mo kenera eseese, ina ia mafai ai ona faʻalauteleina fasi vaega o kenera i se taimi puupuu.

I le taimi nei, o le PCR e mafai ona vaevaeina i ni vaega se tolu, e taʻua o PCR masani, PCR faʻateleina ma PCR numera.

Le tupulaga muamua o PCR masani

Fa'aaogā se meafaigāluega fa'alautele PCR masani e fa'alautele ai le kenera fa'atatau, ona fa'aaoga lea o le electrophoresis gel agarose e iloa ai le oloa, na'o le au'ili'iliga lelei e mafai ona fai.

O mea le lelei autu o le PCR muamua o augatupulaga:

1. Prone i le faʻapitoa faʻapitoa ma taunuʻuga lelei sese.

2.O le suʻesuʻeina e umi se taimi ma o le gaioiga e faʻalavelave.

3.Only su'ega agavaa e mafai ona faia

Augatupulaga Lua-Taimi Moni PCR

Real-Time PCR, lea e taʻua foi o le qPCR, e faʻaaogaina suʻesuʻega fluorescent e mafai ona faʻaalia ai le alualu i luma o le faiga o tali, ma mataʻituina le faʻaputuina o oloa faʻateleina e ala i le faʻaputuina o faailoilo fluorescent, ma faʻamasinoina taunuuga e ala i le faʻaogaina o le fluorescence curve.E mafai ona faʻatusatusaina i le fesoasoani a le Cq tau ma le faʻasologa masani.

Talu ai ona o le tekinolosi qPCR o loʻo faʻatinoina i totonu o se faiga tapuni, e faʻaitiitia le avanoa o le faʻaleagaina, ma e mafai ona mataʻituina le faailo o le fluorescence mo le suʻesuʻeina faʻatusatusa, o lea e sili ona faʻaaogaina i le falemaʻi ma ua avea ma tekinolosi sili i le PCR.

E mafai ona vaevaeina mea felanulanua'i o lo'o fa'aaogaina i le PCR fa'a'ale'ale taimi moni: TaqMan su'esu'e fa'amalama, moli mole ma le vali felanulanua'i.

1) TaqMan su'esu'ega fa'afefe:

A'o fa'ateleina le PCR, e fa'aopoopoina se su'esu'ega fa'alelei fa'apitoa a'o fa'aopoopoina se pea fa'avae.O le su'esu'ega o se oligonucleotide, ma o pito uma e lua o lo'o fa'ailogaina i se fa'aupuga fa'amalama fa'asalalau ma se vaega fa'amalama e tineia.

A fa'amautu le su'esu'ega, o le fa'ailo fa'amalama e tu'uina atu e le vaega fai lipoti e fa'afefe e le vaega fa'amalo;i le taimi o le PCR amplification, o le 5′-3′ exonuclease gaoioiga o Taq enzyme pipii ma degrades le suʻesuʻega, faia le fai lipoti fluorescent vaega ma tineia O le vaega fluorescent ua tuueseeseina, ina ia mafai e le fluorescence mataituina faiga e mafai ona maua le faailo fluorescence, o lona uiga, o taimi uma e matua faateleina ai le DNA strand, o se faiga fluorescent o le fluorescent faakomepiuta o le faʻatupuina o le fluorescent faʻapipiʻiina atoa. le oloa PCR.

2) SYBR lanu felanulanua'i:

I le PCR reaction system, ua fa'aopoopoina le sili atu o le SYBR fluorescent dye.A mae'a ona le tu'ufa'atasia le vali felanulanua'i o le SYBR i totonu o le fa'ailoga fa'alua o le DNA, e fa'ailoa mai ai se fa'ailo fa'alelei.O le mole lanu SYBR e le o tuʻufaʻatasia i totonu o le filifili o le a le tuʻuina atu soʻo se faʻailoga fluorescent, ma faʻamautinoa ai le faʻailoga faʻafefe O le faʻateleina o oloa PCR ua faʻafetaui atoatoa ma le faʻateleina o oloa PCR.SYBR na'o le fusifusia i le DNA fa'alua, o lea e mafai ai ona fa'aoga le liusuavai e iloa ai pe patino le tali a le PCR.

3) faailoilo mole:

O se su'esu'ega oligonucleotide fa'ailoga fa'a-fa'a-fa'a-fa'ailoga e fai ai se fausaga fa'aulu e tusa ma le 8 fa'avae i le 5 ma le 3 pito.O fa'asologa o le nucleic acid i pito uma e lua e fetaui lelei, ma mafua ai ona fufusi le vaega felanulanua'i ma le vaega tineia.Tapuni, e leai se fluorescence o le a gaosia.

A maeʻa ona gaosia le oloa PCR, i le taimi o le faʻaogaina, o le ogatotonu o le molecular beacon e faʻapipiʻiina ma se DNA faʻapitoa, ma o le gene fluorescent e vavae ese mai le gene quencher e maua ai le fluorescence.

Le faʻaletonu autu o le PCR lona lua:

O lo'o fa'aletonu pea le fa'alogo, ma e le sa'o le su'esu'eina o fa'ata'ita'iga e maualalo-kopi.

O lo'o i ai le fa'aa'afiaga o le tau o tua, ma o le i'uga e ono fa'alavelave.

A iai ni fa'ainitaneti PCR i le faiga fa'afoliga, o fa'ai'uga e maua e faigofie ona fa'alavelave.

Tulaga lona tolu PCR numera

Digital PCR (DigitalPCR, dPCR, Dig-PCR) e fa'atatau le numera kopi o le fa'asologa fa'asologa e ala i le su'esu'eina o le fa'ai'uga, ma e mafai ona fa'atino sa'o sa'o le su'esu'ega fa'afuainumera e aunoa ma le fa'aogaina o fa'atonuga i totonu ma pupuni masani.

E fa'aogaina e le PCR fa'atekinolosi le su'esu'ega fa'ai'uga ma e le fa'alagolago i le tau o le Ct (threshold threshold), o le mea lea e fa'aitiitia ai le a'afia o le PCR fa'afuainumera i le fa'atuputeleina lelei, ma fa'aleleia atili ai le fa'apalepale i le fa'aogaina o le PCR, fa'atasi ai ma le sa'o maualuga ma le toe gaosia.

Ona o uiga o le maaleale maualuga ma le saʻo maualuga, e le faigofie ona faalavelaveina e PCR tali inhibitors, ma e mafai ona ausia le quantification atoatoa moni e aunoa ma oloa masani, lea ua avea ma se suesuega ma le hotspot talosaga.

E tusa ai ma ituaiga eseese o le vaega tali, e mafai ona vaevaeina i ni ituaiga autu se tolu: microfluidic, chip ma droplet system.

1) Microfluidic numera PCR, mdPCR:

Faʻavae i luga ole tekonolosi microfluidic, o le DNA template e vavae ese.E mafai e le tekinolosi microfluidic ona iloa le faʻataʻitaʻiga nano-faʻaleleia poʻo le faʻatupuina o matāua laiti, ae o le matāua e manaʻomia se auala faʻapitoa faʻapitoa ona tuʻufaʻatasia lea ma le PCR reaction system.mdPCR ua faasolosolo malie ona faʻaaogaina e isi metotia sui.

2) PCR fa'akomepiuta fa'avae matāua, ddPCR:

Fa'aaogā tekinolosi fa'atupu matāua vai-i-suau'u e fa'agasolo ai le fa'ata'ita'iga i matāua, ma vaevae le faiga fa'afoliga o lo'o i ai molela'au nucleic acid i le faitau afe o matāua nanoscale, o ia mea ta'itasi e le o iai le mole mole fa'atatau o le nucleic acid e iloa, po'o E iai le tasi i le tele o mole fa'atatau nucleic acid e su'eina.

3) PCR numera fa'avae chip, cdPCR:

Fa'aaogā le fa'atekonolosi auala vai tu'ufa'atasia e togitogia ai le tele o microtubes ma microcavities i luga o fa'ama'i sikoni po'o tioata quartz, ma fa'atonutonu le tafe o le vaifofo e ala i va'a fa'atonutonu eseese, ma vaevae le vai fa'ata'ita'i i nanometers o le lapo'a tutusa i totonu o vaieli tali mo fa'afuainumera PCR Reaction e ausia le quantification atoatoa.

O mea le lelei autu o le PCR lona tolu o augatupulaga:

E taugata meafaigaluega ma reagents.

E maualuga le tulaga manaomia o le mamanu.Afai e sili atu le aofaʻi o le faʻataʻitaʻiga i le aofaʻi microsystem, o le a le mafai ona faʻatusatusa, ma afai e laʻititi tele, o le a faʻaitiitia le saʻo o le faʻatusatusaga.

E mafai fo'i ona fa'atupuina fa'ailoga lelei pe a iai le fa'aupuga e le fa'apitoa.