O le tau o le Ct o le fa'aaliga pito sili lea ona taua ole fa'aaliga ole PCR.E fa'aoga e fa'atatau le eseesega o fa'aaliga o kenera po'o le numera kopi o gene.O le a la le tau Ct o le fa'avasegaina o le fluorescence e manatu talafeagai?E fa'afefea ona fa'amautinoa le fa'aogaina lelei o le tau o le Ct?

Ole a le tau ole Ct?
I le faagasologa o le faʻalauteleina o le qPCR, o le numera tutusa o faʻataʻamilosaga faʻasolosolo (Tulaʻau Taʻamilosaga) pe a oʻo atu le faailo o le fluorescence o le oloa faʻateleina i le faʻasologa o le fluorescence.O le C o loʻo faʻatusa mo le Taʻamilosaga ma le T o le Threshold.I se faaupuga faigofie, o le tau o le Ct o le numera o taʻamilosaga e fetaui ma le taimi e oʻo atu ai le faʻalauteleina o faʻataʻitaʻiga i se aofaʻi o oloa ile qPCR.O le mea e taʻua o "se aofaʻiga o oloa" o le a faʻamatalaina atili mulimuli ane.

O le a le mea e fai e le tau o le Ct?

1. Fegalegaleaiga i le va o le faʻalauteleina o le faʻateleina, le aofaʻi o faʻataʻitaʻiga ma le tau Ct
O le mea e sili ona lelei, o kenera i le qPCR e faʻaputuina e ala i le faʻateleina faʻateleina pe a maeʻa se numera o taamilosaga.O le sootaga i le va o le numera o taamilosaga faʻateleina ma le aofaʻi o oloa o le: Faʻateleina le aofaʻi o oloa = numera muamua o faʻataʻitaʻiga × (1+En) numera taʻamilosaga.Ae ui i lea, o le tali qPCR e le o taimi uma i se tulaga lelei.A oʻo atu le aofaʻi o oloa faʻateleina i se "tele o oloa", o le numera o taʻamilosaga i lenei taimi o le tau Ct, ma o loʻo i ai i le vaitaimi faʻateleina faʻateleina.Le sootaga i le va o le tau Ct ma le aofaʻi o faʻataʻitaʻiga amata: E iai se fesoʻotaʻiga laina i le va o le Ct tau o le mamanu ma le logarithm o le numera kopi amata o le mamanu.O le maualuga o le fa'atonuga muamua o le fa'ata'ita'iga, o le la'ititi lea o le tau o le Ct;o le maualalo o le faʻatonuga muamua o le mamanu, o le tele o le tau Ct.

2.Amplification curve, fluorescence threshold ma nisi aofaiga PCR oloa
Ole aofaʻi ole oloa faʻateleina o le qPCR o loʻo tuʻuina saʻo mai ile faʻailoga o le fluorescent signal, o lona uiga, o le faʻalauteleina o le puʻupuʻu.I le amataga o le PCR, o le faʻalauteleina o loʻo i lalo o tulaga lelei, o le numera o taamilosaga e laʻititi, o le faʻaputuina o oloa e laʻititi, ma o le maualuga o le fluorescence e le mafai ona faʻamaonia manino mai le faʻasologa o le fluorescence.A maeʻa lena, faʻateleina le fluorescence ma ulufale i le vaega faʻapitoa.Ole aofaiga ole oloa PCR e mafai ona iloa ile taimi patino pe a na'o le tali a le PCR ile vaega fa'atele, lea e mafai ona fa'aaogaina e avea ma "se aofa'i o oloa", ma o le ulua'i anotusi o le fa'ata'ita'iga e mafai ona toesea mai lenei.O le mea lea, o le malosi o le faailo o le fluorescence e fetaui ma se aofaʻi o oloa o le faʻailoga o le fluorescence.

I le fa'ai'uga o le PCR, ua le toe fa'aalia ai le fa'atuputeleina o le si'osi'omaga, ma ua o'o atu i le laina laina ma le la'asaga laugatasi.

3. Reproducibility o tau Ct
A o'o le ta'amilosaga PCR i le numera o le ta'amilosaga o le tau o le Ct, ua fa'atoa ulufale atu i le vaitaimi moni fa'ateleina fa'ateleina.I le taimi nei, o le mea sese laʻititi e leʻi faʻateleina, o lea o le toe faʻaleleia o le tau o le Ct e sili ona lelei, o lona uiga, o le faʻataʻitaʻiga tutusa e faʻateleina i taimi eseese poʻo i totonu o tubes eseese i le taimi e tasi.Fa'ateleina, o le tau maua Ct e tumau.

1.Amplification lelei En
O le lelei o le fa'alauteleina o le PCR e fa'atatau i le lelei e fa'aliliuina ai e le polymerase le gene ina ia fa'ateleina i se amplicon.O le faʻamalosia lelei pe a suia le mole DNA e tasi i mole DNA e lua e 100%.E masani ona faʻaalia le faʻaleleia atili o En.Ina ia faʻafaigofie le suʻesuʻeina o tala mulimuli ane, o mea e aʻafia ai le faʻaleleia lelei o loʻo faʻaalia puupuu.

2. Va'aiga o tau Ct
O tau Ct e amata mai i le 15-35.Afai o le tau o le Ct e itiiti ifo i le 15, ua manatu o le faʻalauteleina o loʻo i totonu o le vaʻaiga o le taimi faʻavae ma e leʻi oʻo i le maualuga o le fluorescence.O le mea lelei, o loʻo i ai se fesoʻotaʻiga laina i le va o le tau Ct ma le logarithm o le numera kopi muamua o le faʻataʻitaʻiga, o lona uiga, o le taʻavale masani.E ala i le taʻavale masani, pe a oʻo i le 100% le faʻamalosia o le faʻaleleia, o le tau Ct fuafuaina mo le faʻatusatusaina o le numera kopi tasi o le gene e tusa ma le 35. Afai e sili atu nai lo le 35, o le numera muamua o kopi o le mamanu e itiiti ifo nai lo le 1, lea e mafai ona manatu e leai se uiga.

Mo laina eseese o kenera Ct, ona o le eseesega i le numera kopi o le kenera ma le faʻaleleia lelei o le aofaʻi muamua o le faʻataʻitaʻiga, e manaʻomia le faia o se faʻataʻitaʻiga masani mo le kene ma fuafua le laina faʻaogaina o le gene.

3. Fa'aosoina mea taua ole Ct tau
Mai le fesoʻotaʻiga i le va o le aofaʻi o faʻataʻamilosaga faʻateleina ma le aofaʻi o oloa: aofaʻi o oloa faʻateleina = aofaʻi o le faʻataʻitaʻiga muamua × (1 + En) numera taʻamilosaga, e mafai ona iloa i lalo o tulaga lelei, o le aofaʻi o le uluaʻi faʻataʻitaʻiga ma En o le ai ai se aafiaga le lelei ile tau Ct.O le ese'esega o le fa'ata'ita'iga lelei po'o le fa'asiliina lelei o le a mafua ai ona lapo'a tele pe la'ititi le tau o le Ct.

4.Ct tau e telē tele pe laititi tele