Ta'ita'i

Long non-coding RNA, lncRNA ose non-coding RNA ma le umi e sili atu i le 200 nucleotides, masani i le va o le 200-100000 nt.LncRNA e faʻatonutonu le faʻamatalaga o kenera i le epigenetic, transcription ma post-transcriptional level, ma auai i le X chromosome silencing, genome imprinting ma le chromatin modification, transcription activation, transcription interference, felauaiga faaniukilia, cell cycle regulation, cell differentiation regulation, ma fua o le taui o aʻafiaga (Tulafono ma le faʻaleagaina o faʻamaʻi e fesoʻotaʻi ma faʻamaʻi a le tagata) , ma o le taimi nei o se tasi o nofoaga vevela i le fanua o biomedicine.

01  Ituaiga ma uiga o le LncRNA

lncRNA ua vaevaeina i le tele o ituaiga e tusa ai ma punaoa eseese o lona faʻavaeina, e pei ona faʻaalia i le ata i luga.E iai uiga nei:

1. lncRNAs e masani ona umi, fa'atasi ai ma fa'aaliga fa'amalosi ma auala fa'apipi'i 'ese'ese i le taimi o fa'avasegaga
2. Fa'atusatusa i genes coding, lncRNA e masani lava ona maualalo le fa'aaliga
3. O le tele o lncRNAs e iai fa'amatalaga fa'apitoa fa'aletino ma fa'aleaganu'u fa'apitoa i le fa'agasologa o le fa'avasegaina o le tino ma le atina'eina.
4. E iai fa'aaliga fa'apitoa i tuma ma isi fa'ama'i
5. O nofoaga pito i lalo ole lncRNA e eseese
6. E maualalo le fa'asologa i le fa'asao, ae o le galuega e i ai se tikeri fa'asao, ma isi.

02 Fesili e fai soo e uiga i le LncRNA Reverse Transcription

Ona o le maualalo o mea o loʻo i totonu o le lncRNA i sela, umi umi ma le maualuga o le fausaga, o ia RNA e masani ona i ai ni fausaga faʻalavelave e pei o faʻamaufaʻailoga poʻo lauulu, ma o le RT-qPCR e faigofie i faʻafitauli o le le manuia o faʻaliliuga faʻaliliu poʻo le maualalo le lelei.

03 LncRNA toe fa'aliliu fa'aliliuga

I totonu o le tulafono tutotonu, o le faagasologa o siama RNA e faʻaaoga ai a latou lava transcriptase faʻasolosolo e faʻapipiʻi ai le DNA e faʻaaoga ai le RNA e fai ma faʻataʻitaʻiga e taʻua o le faʻaliliuga.O le fa'agasologa o le fa'aogaina o le RNA virus reverse transcriptase e fa'apipi'i ai le cDNA template in vitro e ta'ua o le fa'aliliuga fa'aliliu.O elemene autu o loʻo aofia i totonu o le faʻasologa faʻaliliuga: RNA template, reverse transcriptase, primers ma isi vaega.

1.RNA mamanu

O le a'afiaga o le RNA fa'ata'ita'iga i luga o fa'aliliuga fa'aliliu e fa'aalia i lona fausaga, mama ma fa'amaoni.O le maualuga o le mama ma le faʻamaoni o le RNA na maua mai, o le maualuga o le lelei o le faʻaliliuga faʻaliliu ma sili atu le saʻo o faʻaiʻuga faʻasologa mulimuli ane.O le RNA fa'amamāina e fa'aaoga masani RNA extraction reagents e masani ona aofia ai toega o le ava malosi ma masima guanidine, lea e i ai le malosi fa'alavelave i le tele o transcriptase fa'aliliu.

2. Reverse transcriptase

O le Reverse transcriptase e iai sona a'afiaga i le faiga atoa o fa'aliliuga fa'aliliu.O le vevela talafeagai mo le reverse transcriptase o loʻo faʻaaogaina i le tele o fale suʻesuʻe e masani lava 42°C.O le mea moni, o le tatalaina o le fausaga maualuga o le RNA e manaʻomia ai le maualuga o le vevela, ma o manaʻoga mo le transcriptase faʻasolosolo e maualuga atu.

3.Palemia

O fa'asologa fa'aliliuga fa'aliliu e aofia ai fa'amatalaga fa'apitoa fa'apitoa, fa'asologa fa'afuase'i ma fa'ailoga ole Oligo dT.Ole tele o lncRNAs e leai ni si'usi'u polyA, ma e taua le fa'afetaui lelei o fa'asologa fa'asolosolo ma Oligo dT.

4.O isi vaega

I le vaʻaia o le mea moni o le RNA e matua faigofie lava ona faʻaleagaina, o le faʻaofiina o vaega i le faʻaliliuga faʻaliliuga e mafai ona faʻaitiitia, lea e mafai ona puipuia lelei le ulufale mai o le RNase ma faʻamautinoa le sologa lelei o le alualu i luma o le toe faʻaliliuina.

Foregenemaua mai le RNA template, toe fa'aliliu i le qPCR

Fa'asolo atoa lau su'esu'ega lncRNA

Manu Aofa'i RNA InofofuaPusa (fa'atasi ai ma koluma aveese le gDNA)

Cell Aofa'i RNA InofofuaPusa (fa'atasi ai ma koluma aveese le gDNA)

Lnc-RT HeroTM I(Faatasi ai ma le gDNase)(Super Premix mo le fa'asologa muamua o le cDNA mai le lncRNA)

Taimi Moni PCR EasyTM-SYBR Green I

Amea lelei ofRNA su'ega:

O le pusa e faʻaaogaina le faʻaogaina o tekonolosi RNA lona tolu, e le manaʻomia le faʻaaogaina o le DNase.

11 minute mai le 96, 24, 12, ma le 6-well plate cultured cell, maualuga-lelei le fa'aaogaina o le gDNA-sa'oloto, maualuga-mama, maualuga-lelei atoa cell RNA.

Tulaga lelei o le lncRNA toe fa'aliliuina:

O se faiga fa'aliliuga fa'aliliu fa'apitoa na atia'e mo LncRNA e fa'avave ona aveese fa'ama'i fa'ama'i genomic DNA.

O le fa'aliliuga fa'aliliu'ese'ese e maualuga le mautu o le vevela ma o lo'o lelei pea le fa'asologa o fa'aliliuga i le 50°C.

O faʻataʻitaʻiga e maualuga le GC ma faʻalavelave faʻapipiʻi tulaga lua e mafai ona fesuiaʻi ma maualuga le lelei.

Tulaga leleiof qPCR:

Amata vevela Foregene Taq Polymerase e maualuga atu le faʻaleleia atili, maualuga le faʻaogaina o le faʻamalosi, ma le maualuga o le faʻapipiʻi faʻapitoa.

O le optimized Real PCR Easy Mix faia SYBR Green E maualuga atu loʻu maaleale, ma o lona malosi fluorescence e 3-5 taimi o oloa tutusa, lea e mafai ona fetaui ma manaʻoga o ituaiga eseese o suʻega faʻataʻitaʻiga.