O e fa'aaogaina pea le Trizol e aveese mai ai le RNA?
Gosh, aua nei ou popole i lou soifua maloloina!
Trizol ua lata ona fa'a'esea, aua e te ta'u mai o lo'o e i ai pea i le pogisa?

O le vaega autu o le Trizol reagent o le phenol, ma o loʻo faʻapipiʻiina foi mea faʻapitoa e pei o le chloroform i le faʻataʻitaʻiga.O le a'afia umi o le a afaina ai lou soifua maloloina, aemaise o le pa'i tuusa'o o le pa'u e mafai ona mafua ai le mu tuga o vaila'au ma ma'ila tumau.

I lalo o tulaga masani, e mafai e paʻaga falesuesue ona faʻaitiitia faʻalavelave e ala i le faʻaauupegaina atoatoa o latou lava (ofuina o ofu talaloa, totigilima ma matapulepule).

Ma o laʻu fautuaga ia te oe o le: faʻamolemole sui Trizol saʻo e aloese ai mai le afaina mai le puna.

1. Le augatupulaga muamua oloa o le RNA extracts
Sau i fafo i le 1987 (Trizol reagents)

manuia:
Fa'ato'a fa'ato'a fa'ato'aga

Fa'aletonu:
E manaʻomia ni vailaʻau oona e pei ole guanidine isothiocyanate-phenol-chloroform;
Fa'agaioiga faigata;
Mana'omia le fa'aoga DNase e aveese ai le fa'aleagaina ole DNA

2. Le gaosiga lona lua o le gaosiga o le RNA
Sau i fafo i le 1994 (QIAGEN RNeasy ma le tele o oloa fa'apitonu'u)

manuia:
Ole auala centrifugal o loʻo faʻaaogaina, lea e faigofie ona faʻaogaina;

Fa'aletonu:
Mana'omia le centrifuge e aveese ai lapisi
Mana'omia le fa'aoga DNase e aveese ai le fa'aleagaina ole DNA

3.O le gaosiga lona tolu o le RNA extraction
Sau i fafo i le 2005 (QIAGEN RNeasy Plus ma ForegeneRNA fa'amama fa'asologa oloa)

manuia:
Fa'aoga sa'o le koluma e aveese ai le DNA e aveese ai le DNA ma otaota i le taimi e tasi, sefe le taimi ma taumafaiga;
Saogalemu ma faigofie, e le manaʻomia le faʻaopoopoina o le koluma faamama ma le DNase e faigofie ona aveese mea leaga ma aloese mai le faʻaleagaina o DNA

Seʻi o tatou vaʻavaʻai i le eseesega o galuega i le va o le oloa muamua-tupulaga (Trizol), le oloa lona lua-tupulaga (RNeasy) ma le oloa lona tolu-tupulaga (Foregene) o le RNA extraction:

O le gaioiga i le ata e manino: o le oloa lona tolu o augatupulaga o loʻo i ai tulaga lelei

Na'o le tolu upu e fa'amatala: faigofie!Anapogi!Saogalemu

Le siata PK o fa'ai'uga fa'ata'ita'igamoo le augatupulaga muamua, lona lua-tupulaga ma le tolu-tupulaga oloa o le RNA fa'asaoina:

1. Electrophoretogram

Le tupulaga muamua (1: Trizol)
O le tupulaga lona lua (2:QIAGEN RNeasy)
O le tupulaga lona tolu (3: QIAGEN RNeasy fa'aopoopo, 4: Foregene)

O le a le ituaiga oloa e lelei, o le ae iloa e ala i le faʻatusatusaina
RNA na maua mai ile fa'aogaina ole Foregene kit
E le gata i le maualuga o le faʻatonuga ae faʻapea foi le amio saʻo lelei

2.qPCR kalafi (fa'ateleina kalafi pi'o)

Le tupulaga muamua (Trizol)

O le tupulaga lona lua (lagi lanumoanalona uigaQIAGEN RNeasy-, mumulona uigaQIAGEN RNeasy +)

O le tupulaga lona tolu (lanu moana o lona uiga Foregene, lanu meamata o lona uiga QIAGEN RNeasy fa'aopoopo)

(Manatua: O le QIAGEN RNeasy lona lua o le kalafi qPCR o lona uiga e le faʻaopoopoina e le pusa le DNase ma e le aveesea ai le faʻaleagaina o DNA. O le mea lea, o le CT e maualuga atu ma e le saʻo le taunuuga; QIAGEN RNeasy + o lona uiga ua faʻaopoopo le DNase ma ua aveese le faʻaleagaina o le DNA, ma o le taunuuga e saʻo)

Pe ose electrophoregram po'o se PCR amplification curve graph, o le lelei o oloa Foregene e le maualalo i oloa mai fafo.