Folasaga:

RNA, igoa faasaienisi ribonucleic acid, o lona faapuupuuga e sau mai le RiboNucleic Acid, o se ituaiga o nucleic acid e fausia e ala i le faʻafesoʻotaʻi a itiiti mai o le tele o ribonucleotides e ala i fusi phosphodiester.

O le autu o le su'esu'eina o le RNA o le su'eina lea o le Aofa'i RNA e leai se filogia, ma o le fa'avae autu o le RNA e mafai ona aotele fa'apea:

1. Faʻalavelave muamua sela

2. Ona aveese lea o mea eleelea macromolecular (porotini, lipids, DNA, ma isi)

3. Mulimuli ane, o le RNA o loʻo faʻafefeteina aʻo aveese masima ma solu faʻaletino, ma faʻamamaina atili le RNA.

O le taimi ua tuana'i ma le taimi nei o le fa'aaogaina o auala

O le augatupulaga muamua o le RNA auala e aveese ai le auala TRIzol precipitation (reagents faaaogaina e aofia ai guanidine isothiocyanate, phenol, chloroform, ma isi) na fatuina e se tamamatua e igoa ia Piotr Chomczynski ma tinamatua Nicoletta Sacchi, aua o lenei mea fou e mafai ai RNA suʻesuʻega vave ma faigofie, talu mai lena taimi na amata ai le siitia o le RNA.

Mulimuli ane, na faʻatau atu e Tamamatua lenei pateni i Invitrogen, ma faʻalauiloa e Invitrogen lenei metotia i le lalolagi ma avea ma auala faʻaaoga lautele.

Mulimuli ane, na maua e Thermo le Invitrogen!

Mea fai sui: Invitrogen's TRIzol reagent

Ae ui i lea, o le TRIzol precipitation method e manaʻomia ai le tele o timuga ma le aveeseina o le RNA, ma o mea e faʻaaogaina e oona ma umi se taimi e faʻaogaina ai.

O le mea lea, na oʻo mai ai le auala lona lua o le faʻamamāina o le koluma-enzyme, e faʻaaoga ai le membrane silica gel e avea o se mea faʻapipiʻi nucleic acid adsorption e faʻateleina ai le toe faʻaleleia o le RNA i le faʻataʻitaʻiga aʻo aveese isi mea leaga.

O le auala lona lua e faʻafaigofie ai le gaioiga i luga o le faʻavae o le faʻatinoina o le faʻatinoga, faʻaitiitia le tulaga lamatia, ma faʻaleleia le lelei o le RNA extraction.

Sui oloa: QIAGEN RNE faigofie ma le tele o oloa fa'apitonu'u

Ae ui i lea, o auala muamua ma lona lua o augatupulaga e manaʻomia ai le faʻaogaina o le DNase e aveese ai le faʻaleagaina o DNA, lea e aumaia ai ni faʻalavelave i faʻataʻitaʻiga mulimuli ane.O le DNase totoe o le a faʻaitiitia ai le lelei o le faʻaliliuina o tusitusiga ma faʻaitiitia le faʻasologa o le cDNA muamua, ma aʻafia ai le saʻo o taunuuga.

O le mea lea, o le auala lona tolu o le faʻaaogaina o augatupulaga e sili ona lelei i luga o le faavae o le lona lua o augatupulaga.Ole su'esu'ega e le mana'omia le fa'aopoopoina o ni enzymes, ma e faigofie ona maua le RNA ile na'o le lua koluma.

Koluma 1: DNA-Cleaning Koluma e fa'amama ai le DNA

Koluma 2: RNA-na'o le Koluma e fa'apipi'i ma toe fa'afo'i mai le RNA

O se fa'agaioiga faigofie e le gata ina fa'asaoina le taimi, ae fa'afaigofie ai fo'i le fa'atinoina o su'ega i lalo!

Sui oloa: QIAGEN RNeasy Plus maForegeneRNA fa'amama fa'asologa oloa

(RNeasy Plus)

(Foregene'sLa'au Aofa'i RNA Isolation Kit）

Fai atu lemu!O le pusa RNA a Foregene o loʻo tuʻuina atu ai foi se RNase Eraser e sili ona faigofie-faʻaaoga, lea e mafai ona aveese atoa le 400μg o le RNase i luga o le eleele malulu i le 1 minute, e aunoa ma le faʻaopopoina o soʻo se mea oona i le tino o le tagata!

Ata1: Siata fa'atusatusaga fa'agasologa o galuega

O oloa a Foregene e mafai ona fa'amae'aina le RNA i le na'o le lua pese, aua le fa'atupu le fuā o isi i lau fa'ata'ita'iga alualu i luma!

Ata2:Efua fa'ata'ita'i siata faatusatusa

Le tupulaga muamua (1: TRIzol)

Le tupulaga lona lua (2: RNeasy of QIAGEN)

O le tupulaga lona tolu (3: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

Ata3: kalafi qPCR (kalafa pupuni fa'alautele)

Le tupulaga muamua (meamata o lona uiga TRIzol -, mumu o lona uiga TRIzol +)

Le tupulaga lona lua (lagi lanumoana o lona uiga QIAGEN RNeasy-, mumu o lona uiga QIAGEN RNeasy +)

O le tupulaga lona tolu (lanumoana o lona uiga o QIAGEN RNeasy fa'aopoopo, lanu meamata o lona uiga o Foregene)

(Manatua: qPCR graph “-” o loʻo faʻaalia ai e leʻi faʻaopoopoina le DNase ma e leʻi aveesea le faʻaleagaina o DNA. O le mea lea, e maualuga atu le CT ma e le saʻo le taunuuga; "+" o loʻo faʻaalia ai ua faʻaopoopo le DNase ma ua aveese le faʻaleagaina o le DNA, o le taunuuga e saʻo)

So'o se fa'afouga fa'atekinisi o lona uiga o le fa'atinoga o le fa'ata'ita'iga o lo'o fa'atupuina i se fa'aoga faigofie ma sili atu le fa'aoga-tagata.

O le sini a Foregene e fesoasoani i le tele o tagata su'esu'e fa'asaienisi e fa'asaoina le taimi ma tau fa'ata'ita'iga, maua fa'ai'uga fa'ata'ita'iga maualuga, ma fa'atupu fa'atasi ni taunu'uga tau su'esu'ega fa'asaienisi.