Le tele o mea fou fou i le tala faasolopito o tekinolosi faʻamatalaga i loʻu mafaufau o le immunolabeling technology e faʻavae i luga o le mataupu faavae o le faʻapipiʻiina o le antigen-antibody specific, PCR technology ma sequencing technology.O le asō o le a tatou talanoa e uiga i tekinolosi PCR.E tusa ai ma le atinaʻeina o tekinolosi PCR, e masani ona vaevaeina e tagata tekinolosi PCR i augatupulaga e tolu: tekinolosi PCR masani, tekonolosi PCR faʻataʻitaʻi taimi moni ma tekinolosi PCR numera.
Common PCR metotia
KARY MULLIS (1944.12.28-2019.8.7)
Na fatuina e Kary Mullis le tali a le polymerase chain reaction (polymerase chain reaction, PCR) i le 1983. Fai mai a o ia aveina lana uo teine, na faafuasei lava ona i ai se moli o musumusuga ma mafaufau i le mataupu faavae o le PCR (i le aoga o le avetaavale).Na maua e Kary Mullis le Nobel Prize in Chemistry i le 1993. Na taʻua e le New York Times: "O le mea muamua ma le taua, toetoe lava vaevae le biology i taimi muamua-PCR ma post-PCR.
Le mataupu faavae o le PCR: I lalo o le catalysis o le DNA polymerase, o le tina strand DNA o loʻo faʻaaogaina e fai ma faʻataʻitaʻiga, ma o le mea faʻapitoa faʻapitoa e faʻaaogaina e fai ma amataga o le faʻaopoopoga, ma o le tamaʻitaʻi DNA e faʻapipiʻi i le tina mamanu DNA e kopiina i vitro e ala i le denaturation, annealing, faʻaopoopoga ma isi laasaga.O se DNA synthesis amplification technology in vitro, lea e mafai ona faʻavavevave ma faʻapitoa faʻalautele soʻo se DNA taulaʻi i vitro.
Tulaga lelei o PCR masani
1.Auala masani, atoatoa tulaga faava o malo ma totonu o le atunuu
2.Tau maualalo o mea faigaluega reagents
3.E mafai ona toe maua mai oloa PCR mo isi su'esu'ega o meaola mole mole
Fautuaina Foregene PCR masini: https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
O oloa fa'atatau: https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
Le lelei o PCR masani
1.faigofie ona fa'aleagaina
2.galuega faigata
3.na'o le qualitative analysis
4.Ma'ale'ale lelei
5.O loʻo i ai le faʻalauteleina e le faʻapitoa, ma pe a tutusa le tele o le faʻaupuga e le faʻapitoa ma le faʻailoga faʻapitoa, e le mafai ona faʻamaonia.
Capillary electrophoresis-fa'avae PCR
I le tali atu i faʻaletonu o PCR masani, o nisi tagata gaosi oloa ua faʻalauiloaina meafaigaluega e faʻavae i luga o le mataupu faavae o le electrophoresis capillary.Ole laasaga ole electrophoresis pe a maeʻa le PCR faʻalauteleina i totonu ole capillary.O le lagona e maualuga atu, ma o le eseesega o le tele o faʻavae e mafai ona faʻamaonia ma le faʻalauteleina e mafai ona fuafuaina e MAERKER.mea e maua ai oloa.O le mea le lelei o le PCR oloa e manaʻomia pea ona tatala ma tuʻu i totonu o le meafaigaluega, ma o loʻo i ai pea se lamatiaga tele o le faʻaleagaina.
CapillaryElectrophoresis
2. Fa'ata'ita'iga fa'amemelo fa'amalama PCR (Quantitative Real-time PCR, qPCR) tekonolosiFluorescent quantitative PCR, e taʻua foʻi Real-Time PCR, o se nucleic acid quantitative technology fou ua atiaʻe e PE (Perkin Elmer) i le 1995. O le talafaasolopito o le atinaʻeina o le fluorescent quantitative PCR o se talaʻaga o tauiviga faʻaosofia agaga o tagata tino ese e pei o ABI, Roche, ma Bio-Rad.Afai e te fiafia, e mafai ona e siakiina.O lenei metotia o le taimi nei e sili ona matua ma fa'aaoga lautele semi-quantitative PCR technique.
Fautuaina qPCR Machine:https://www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/
Metotia lanu felanulanua'i (SYBR Green I):O le SYBR Green I o le vali e masani ona faʻaaogaina DNA mo PCR quantitative, lea e fusifusia e le faʻapitoa i le DNA faʻalua.I le tulaga saoloto, SYBR Green emits vaivai fluorescence, ae o le taimi lava e fusifusia i le lua-stranded DNA, o lona fluorescence faateleina 1000-paiga.O le mea lea, o le aofa'i o fa'ailo fa'amalama e fa'aosoina e se tali e fa'atatau i le aofa'i o le DNA fa'alua-fa'alua o lo'o iai ma o le a fa'ateleina i le fa'ateleina o oloa fa'ateleina.Talu ai ona o le vali e le fa'apitoa e fusifusia i le DNA fa'alua, e mafai ona maua ni fa'ai'uga lelei sese.
O oloa fa'atatau: https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/
Metotia su'esu'e fa'alelei (Taqman technology): I le taimiPCR amplification, o se su'esu'ega fa'alelei fa'apitoa e fa'aopoopoina i le taimi lava e tasi e pei o se pa'aga fa'avae.Ole su'esu'ega ole laina ole oligonucleotide, fa'atasi ai ma se vaega fai lipoti felanulanua'i ma se vaega fa'amae'e fa'aigoa fa'ailoga i pito uma e lua.A fa'amautu le su'esu'ega, o le fa'ailo fa'amalama e fa'auluina e le vaega fai lipoti e fa'afefe e le kulupu tineia, ma o le su'esu'ega E leai se fa'ailo fa'amalama;i le taimi o le faʻalauteleina o le PCR (i le faʻalauteleina o le tulaga), o le 5'-3' Dicer gaioiga o le Taq enzyme o le a faʻafefe ma faʻaleagaina le suʻega, ina ia vavaeeseina le vaega o le fluorescent ma le vaega fluorescent tineia, ina ia mafai ona maua le faʻaogaina o le fluorescent signal, o lona uiga, o taimi uma lava e faʻateleina ai le filifili DNA, o le faʻamaopoopoina o le DNA ma le faʻaupuga o le faʻaupuga o le faʻaupuga atoa o le faʻamalama o le faʻamalama o le faʻamalama o le DNA. fausia o oloa PCR.Ole auala ole su'esu'e ole Taqman ole auala e masani ona fa'aogaina ile su'esu'ega ile falema'i.
Oloa fa'atatau: https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/
Tulaga lelei o le qPCR
1.O le auala ua matua ma o meafaigaluega lagolago ma reagents ua atoatoa
2.Tau feololo o reagents
3.faigofie ona fa'aoga
4.Ma'ale'ale maualuga iloa ma fa'apitoa
Le lelei ole qPCR
O le suiga o le kenera taula'i e o'o atu ai i le misia o le iloa.
Ole fa'ai'uga ole su'esu'ega ole fa'ata'ita'iga maualalo e le mafai ona fa'amauina.
O loʻo i ai se mea sese tele pe a faʻaaogaina le faʻasologa masani mo suʻesuʻega faʻatusatusa.
3. Digital PCR (numera PCR, dPCR) tekinolosi
O le PCR numera o se metotia mo le faʻatusatusaina atoatoa o molelaʻau nucleic acid.Pe a faatusatusa i le qPCR, e mafai e le PCR numera ona faitau saʻo le numera o mole mole DNA/RNA, o le aofaʻiga atoatoa lea o molelaʻau nucleic acid i le faʻataʻitaʻiga amata.I le 1999, na faʻaalia aloaia ai e Bert Vogelstein ma Kenneth W. Kin-zler le manatu o le dPCR.
I le 2006, o le Fluidigm o le tagata muamua na gaosia se meafaigaluega dPCR faʻatau pisinisi.I le 2009, na faalauiloa ai e le Life Technologies le OpenArray ma QuantStudio 12K Flex dPCR faiga.I le 2013, na faʻalauiloa ai e le Life Technologies le QuantStudio 3DdPCR system, lea e faʻaogaina ai le maualuga o le nanoscale microfluidic chip technology e tufatufa tutusa faʻataʻitaʻiga i le 20,000 sela taʻitasi.i le tali lelei.
I le 2011, na faalauiloa ai e Bio-Rad le meafaigaluega QX100 dPCR e faavae i le matāua, lea e faaaogā ai le tekonolosi vai-i-suauʻu e tufa tutusa ai le faataʻitaʻiga i le 20,000 matāua-vai-i-suauʻu, ma faʻaaogaina se suʻesuʻega matāua e iloilo ai matāua.I le 2012, na faʻalauiloa ai e RainDance le meafaigaluega a le RainDrop dPCR, faʻauluina e le kasa maualuga, e vaevae taʻitasi faiga masani faʻaalia i se tali faʻafefe e aofia ai le 1 miliona i le 10 miliona picoliter-level micro-droplets.
E o'o mai i le taimi nei, ua fausia ai e le PCR numera ni vaega tetele se lua, ituaiga chip ma le droplet type.E tusa lava po o le a le ituaiga PCR numera, o ona mataupu faavae o le faʻatapulaʻaina o le faʻafefe, PCR pito ma le tufatufaina o Poisson.O le faiga masani PCR tali faiga o loʻo i ai mamanu nucleic acid ua vaevaeina tutusa i le fiasefulu afe o tali PCR, lea e tufatufa atu i meataalo po o microdroplets, ina ia tali taitasi e aofia ai le tele e mafai ai se mole mole, ma faia se tasi-molole mamanu PCR tali atu.E ala i le faitauina o le fluorescence O le i ai poʻo le leai o se faʻailoga e faitaulia, ma o le faʻatusatusaina atoatoa e faia pe a maeʻa le faʻavasegaina o le faʻasologa o fuainumera Poisson.
O uiga ia o le tele o masini komepiuta PCR na ou faʻaogaina:
1. Bio-Rad QX200 droplet numera PCR Bio-RadQX200 o se tulaga mataʻutia PCR faakomepiuta, o le faagasologa o le suʻesuʻeina autu: 20,000 faʻataʻitaʻiga o loʻo faʻatupuina e le afi matāua O le vai-i-suauʻu micro-droplets ua faʻateleina i luga o se masini PCR masani, ma mulimuli ane o le faailo o le fluorescence o micro-droplet taʻitasi e faitau e se tagata faitau micro-droplet.O le taotoga e sili atu ona lavelave, ma o le lamatiaga o le filogia e feololo.
Xinyi TD1 micro-droplet numera PCRXinyi TD1 o se PCR tulaga fa'akomepiuta fa'apitonu'u, o le faiga fa'avae su'esu'e: fa'atupu 30,000-50,000 matāua vai-i-suau'u e ala i se fa'atupu matāua, fa'atele i luga o se meafaigāluega PCR masani, ma mulimuli ane pasi E faitau e le tagata faitau matāua le fa'ailo o matāua ta'itasi.O le fa'atupuina o matāua ma le faitau i totonu o lenei fa'avae e fa'atinoina i totonu o se va'a tu'ufa'atasi ma e maualalo le lamatiaga o le fa'aleagaina.
STILLA Naica micro-droplet chip digital PCRSTILLA Naica ose masini komepiuta PCR fou.Ole faiga fa'avae ole su'esu'ega ole: fa'aopoopo le tali fa'afofoga ile pu, tu'u le pu i totonu ole fa'atupuina o le matāua ma le fa'ateleina, ma fa'atupuina le 30,000 micro-droplets.Fa'asalalau i luga o le pu, ma fa'amae'a le fa'alauteleina o le PCR i luga ole pu.Ona tu'uina atu lea o le pu'upu'u fa'ateleina i le faiga su'esu'ega o le faitauga o le micro-droplet, ma faitau le fa'ailo fa'amalama e ala i le pu'eina o ata.Talu ai o le faagasologa atoa e faia i totonu o se pu tapuni, o le lamatiaga o le faʻaleagaina e maualalo.
4. ThermoFisher QuantStudio 3D chip numera PCR
ThermoFisher QuantStudio 3D o se isi fa'avae PCR fa'akomepiuta fa'avae masini.O lona fa'agasologa autu o le su'esu'eina o le: fa'aopoopo le vaifofo tali i totonu o le mea fa'asalalau, ma fa'asalalau fa'atasi le tali fa'afofoga i luga o le pu ma le 20,000 microwells e ala i le fa'asalalau., tu'u le pu i luga o le masini PCR e fa'alautele, ma mulimuli ane tu'u le pu i totonu o le tagata faitau ma pu'e se ata e faitau ai le fa'ailo felanulanua'i.O le taotoga e fai si faigata, ma o le faagasologa atoa o loʻo faia i totonu o se vaʻa tapuni, ma o le lamatiaga o le faʻaleagaina e maualalo.
5. JN MEDSYS Clarity chip numera PCR
O le JN MEDSYS Clarity o se fa'aputuga PCR numera fa'akomepiuta fou.O lona fa'agasologa o le su'esu'eina o le: fa'aopoopo le vaifofo tali i totonu o le applicator, ma fa'asalalau le tali fa'afofoga tutusa i luga ole 10,000 PCR tubes fa'amau i le PCR tube e ala ile applicator.I luga o le microporous chip, o le tali tali e ulu atu i totonu o le pu e ala i le capillary, ma o le PCR tube ma le pu e tuʻu i luga o le masini PCR mo le faʻalauteleina, ma mulimuli ane tuʻu le pu i totonu o le tagata faitau e faitau le faailo fluorescent e ala i le puʻeina o se ata.O le taotoga e sili atu ona lavelave.E maualalo le tulaga lamatia o le faaleagaina.
O tapula'a o ta'iala PCR numera ta'itasi o lo'o aoteleina fa'apea:
O fa'ailoga o le iloiloga o le PCR fa'afuainumera numera o: le numera o iunite vaelua, le numera o laina fa'afefe, le lavelave o le gaioiga ma le lamatiaga o le fa'aleagaina.Ae o le mea e sili ona taua o le saʻo o le suʻesuʻeina.O se tasi o auala e iloilo ai masini komepiuta PCR o le faʻaogaina lea o le tele o masini komepiuta PCR e faʻamaonia ai e le tasi le isi, ma le isi auala o le faʻaogaina o mea masani ma saʻo tau.
Tulaga lelei o le dPCR
1.Ausia le fa'atatauina atoatoa
2.Ma'ale'ale maualuga ma fa'apitoa
3.E mafai ona iloa fa'ata'ita'iga kopi maualalo
Le lelei o le dPCR1. Mea faigaluega taugata ma reagents 2. Fa'alavelave lavelave ma le umi o le taimi e iloa ai 3. Vaiti le va'aiga
I le taimi nei, o augatupulaga e tolu o tekinolosi PCR ei ai o latou lava lelei ma le le lelei, ma e tofu lava ma a latou lava fanua faʻaoga, ma e le o se mafutaga e suia e le tasi augatupulaga le isi.O le faʻaauau pea o le alualu i luma o tekinolosi ua tuʻuina atu ai le malosi fou i le PCR technology, e mafai ai ona tatalaina le tasi itu faʻaoga i le isi, faʻafaigofie ma saʻo le suʻesuʻeina o le nucleic acid.
Punavai: Dr. Yuan e ave oe mo suʻega
Oloa Fautuaina:
Taimi meli: Nov-18-2022
