PCR Taimi Moni, e ta'ua fo'i o le quantitative PCR po'o le qPCR, ose auala mo le mata'ituina ma le au'ili'iliga o oloa fa'aopoopo PCR.
Ona o le quantitative PCR o loʻo i ai le lelei o le faʻaogaina faigofie, vave ma faigofie, maualuga le lagona, toe faʻaleleia lelei, ma le maualalo o le faʻaleagaina, e faʻaaogaina lautele i suʻesuʻega faʻafomaʻi, suʻesuʻega o vailaʻau faʻamalositino, suʻesuʻega faʻamatalaga o suʻesuʻega, suʻesuʻega transgenic, suʻesuʻeina o kene, suʻesuʻega faʻamaʻi, manu ma laau., su'ega taumafa ma isi matā'upu.
O le mea lea, pe o loʻo e auai i suʻesuʻega faʻavae i suʻesuʻega o le olaga, poʻo tagata faigaluega o kamupani vailaʻau, kamupani faʻatoʻaga manu, kamupani meaʻai, poʻo tagata faigaluega foʻi e ulufale i fafo ma ofisa o karantina, matagaluega mataʻituina le siosiomaga, falemaʻi ma isi iunite, o le a sili atu pe itiiti foi lou faʻaalia Pe e te manaʻomia le iloa o le iloa o le faʻaogaina o le PCR quantitative.

Fa'avae ole PCR Taimi Moni

Real Time PCR o se metotia lea e faʻaopoopoina ai mea faʻafefete i le PCR reaction system, ma o le malosi o le faʻailoga o le fluorescence i le faagasologa o le tali atu o le PCR e mataʻituina i le taimi moni e se mea faigaluega PCR quantitative, ma mulimuli ane suʻesuʻeina ma faʻatautaia faʻamatalaga faʻataʻitaʻiga.

【Pipi fa'aola】o le pupuni o loʻo faʻamatalaina le faʻagasologa malosi o le PCR.O le fa'aupuga o le PCR e le o se fa'asologa fa'apitoa fa'apitoa, ae o le sigmoid curve.

[Vaega fa'avae o le pi'o fa'ateleina]Faatasi ai ma le faateleina o le numera o taamilosaga PCR, le le toe faʻaaogaina o le DNA polymerase, le faʻaitiitia o dNTPs ma primers, ma le faʻalavelaveina o le faʻaogaina o le faʻaogaina e ala i le tali mai o le pyrophosphate, ma isi mea, o le PCR e le faʻalauteleina i taimi uma., ma o le a iu lava ina ulu atu i se laufanua laugatasi.

[Vaega Fa'atuputeleina Fa'atuputeleina o Pi'i Fa'ateleina]E ui lava e eseese tele le vaega o le plateau, i se vaega patino o le faʻalauteleina o le itulagi o le faʻalauteleina o le faʻaogaina, o le toe faʻaleleia e matua lelei lava, lea e taua tele mo le suʻesuʻeina o le PCR.

[Tulaga fa'ailoga ma le tau Ct]Matou te setiina le tau faʻatapulaʻa o le suʻesuʻeina o le fluorescence i le tulaga talafeagai i le vaega o le tuputupu aʻe faʻateleina o le faʻalauteleina o le faʻaogaina, e taʻua o le faʻailoga (Threshold).O le fesoʻotaʻiga o le tau o le faʻailoga ma le faʻaopoopoga o le Ct tau, o lona uiga, o le tau o le Ct e faʻatatau i le numera o taʻamilosaga (Threshold Cycle) pe a oʻo i le tau o le faʻailoga.

O le kalafi o loʻo i lalo o loʻo faʻaalia manino ai le sootaga i le va o le laina pito i luga ma le faʻalauteleina o pupuni, faʻailoga ma le Ct tau.

【E fa'afefea ona fa'atatau?】

Ua fa'amaonia e le matematika o le tau o le Ct o lo'o i ai se feso'ota'iga laina fa'afeagai ma le logarithm o le numera o ulua'i fa'ata'ita'iga.E mata'ituina e le PCR taimi moni oloa fa'ateleina PCR i le taimi moni ma fa'atatauina i le taimi o le fa'ateleina fa'atele.

Mo taʻamilosaga taʻitasi o le PCR, o le DNA na faʻateleina faʻateleina i le 2 taimi, ma e leʻi umi ae oʻo i se tulaga maualuga.

Faʻapea o le aofaʻi o le amataga o le DNA o le A₀ , pe a maeʻa n taamilosaga, o le aofaʻi o mea tau DNA e mafai ona faʻaalia e pei o:

A _n =A ₀ ×2ⁿ

Ma, o le tele o le numera muamua o le DNA A 0, o le vave foi lea o le aofaʻi o le oloa faʻateleina e oʻo atu i le tau suʻesuʻe A , ma le numera o taamilosaga pe a oʻo i le A o le tau Ct.O lona uiga, o le tele o le numera muamua o le DNA A 0, o le vave foi lea o le fa'atupuina o le pi'o i luga, ma e tutusa le numera mana'omia o taamilosaga n e la'ititi.

Matou te faʻataunuʻuina le faʻafefeteina o le tulaga o le faʻatonuga masani ma faʻaaogaina e fai ma faʻataʻitaʻiga mo Real Time PCR, ma o le a maua se faasologa o pupuni faʻalautele i taimi tutusa i le faasologa o le amataina o le aofaʻi o DNA mai le sili atu i le itiiti.E tusa ai ma le laina laina i le va o le tau Ct ma le logarithm o le numera o mamanu amata, ae mafai ona faia [faanau masani] .

I le suia o le tau Ct o le faʻataʻitaʻiga ma le le iloa faʻatonuga i totonu o le faʻasologa masani, e mafai ona maua le aofaʻi muamua o le faʻataʻitaʻiga o le faʻataʻitaʻiga e le iloa le faʻatonuga, o le numera faʻavae o le Real Time PCR.

Su'esu'ega auala ole PCR Taimi Moni

E iloa e le PCR Taimi Moni mea e fa'ateleina ai le PCR e ala i le su'esu'eina o le malosi o le fluorescence i le faiga o tali.

Fa'avae ole Metotia Fa'apipi'i Fua Fa'alelei】

vali felanulanua'i, e pei o le TB Green ® , e mafai ona fusifusia e le faʻapitoa i le DNA faʻalua-lua i totonu o PCR ma faʻafefe i luga o le fusifusia.

O le malosi o le fluorescence i le faiga o tali na faʻateleina faʻatasi ma le faʻateleina o le PCR cycles.E ala i le suʻesuʻeina o le malosi o le fluorescence, e mafai ona mataʻituina le aofaʻi o le faʻalauteleina o DNA i le faiga o tali i le taimi moni, ona mafai ai lea ona faʻatusatusa le aofaʻi o le mamanu amata i le faʻataʻitaʻiga.

【Fa'avae ole metotia su'esu'e fa'alelei】

su'esu'e felanulanua'io se fa'asologa o le nucleic acid fa'atasi ai ma se vaega fa'alelei i le 5' fa'ai'uga ma se kulupu tineia i le 3' fa'ai'uga, lea e mafai ona fusifusia fa'apitoa i le mamanu.Pe a faʻatumauina le suʻesuʻega, o le fluorescence e tuʻuina atu e le fluorophore e tineia e le kulupu tineia ma e le mafai ona faʻafefe.A pala le su'esu'ega, o le a ta'ape le mea fa'amalama ma fa'aosoina le fa'amalama.

E fa'aopoopoina se su'esu'ega fa'alelei ile fofo ole tali ole PCR.A'o fa'agasolo le fa'amauina, o le su'esu'ega fa'alelei o le a fusifusia i le tulaga patino o le fa'ata'ita'iga.I le faagasologa o le faʻaopoopoga, o le 5′→3′ exonuclease gaioiga o le PCR enzyme e mafai ona faʻaumatia le suʻega faʻafefeteina faʻatasi ma le mamanu, ma o le mea e faʻafefeteina e vavae ese e faʻaulu ai le fluorescence.E ala i le su'esu'eina o le malosi o le fluorescence o le su'esu'ega i le faiga fa'afoliga, e mafai ona ausia le fa'amoemoega o le mata'ituina o le aofa'i fa'ateleina o le oloa PCR.

【Filifiliga o le Fluorescence Detection Method】

Afai e faʻaaogaina e iloa ai faʻasologa ma le maualuga o le homology ma faia le tele o PCR suʻesuʻega e pei o le SNP typing analysis, o le auala suʻesuʻe fluorescent e le mafai ona suia.
Mo isi fa'ata'ita'iga PCR Taimi Moni, e mafai ona fa'aogaina se metotia chimera fa'alelei faigofie, faigofie ma taugofie.

su'esu'ega Fa'apitoa fa'apitoa, mafai ona fa'apipi'i PCR

Fa'aletonu

Tulaga maualuga maualuga mo le faʻalauteleina;

multiplex PCR e le mafai ona fa'atino Manaomia le fa'atulagaina o su'esu'ega fa'apitoa, tau maualuga;

o nisi taimi e faigata le mamanu su'esu'e

Oloa Fa'atatau: