Pusa PCR Sa'o Si'u Isu-UNG Direct PCR Lysis Reagent(Si'usi'u I'u)(mo Genotyping)
Fa'amatalaga
O lenei pusa o loʻo faʻaogaina se faiga faʻapipiʻi lysis faʻapitoa e faʻasaʻo vave ai le DNA genomic mai siʻusiʻu o isumu, taliga, maso ma isi faʻataʻitaʻiga faʻataʻitaʻiga mo tali PCR, o lea e fetaui lelei mo suʻesuʻega faʻatupu tele.
O le faagasologa o le tuʻuina atu o DNA genomic mai le lysis buffer e maeʻa i totonu ole 10-30 minute ile 65°C.Leai se isi faiga e pei ole polotini ma le RNA aveese e mana'omia, ma o le DNA fa'amatuu e mafai ona fa'aoga e fai ma fa'ata'ita'iga mo le tali atu o le PCR.
2× M1-PCR FaigofieTMFa'afefiloi (UNG) fa'aoga le dUTP nai lo le dTTP i luga ole fa'avae ole 2× M1-PCR EasyTM Fa'afefiloi (UNG), ma fa'aopoopo i ai le enzyme UNG (Uracil-N-glycosylase) e mafai ona fa'aleagaina le mamanu o lo'o iai le dUTP i le taimi e tasi.A'o le'i faia le tali a le PCR, e fa'aaogaina le enzyme UNG e fa'aleagaina ai le oloa PCR o lo'o iai le uracil.O le enzyme UNG o le a leai se aʻafiaga i luga o le faʻataʻitaʻiga e le o iai le uracil, ma faʻamautinoa ai le faʻapitoa ma le saʻo o le faʻalauteleina ma le puipuia o le avanoa o suʻesuʻega faʻasolosolo tetele.Fa'aleagaina oloa PCR na tupu.
O le D-Taq DNA polymerase o se DNA polymerase na fa'apitoa ona atia'e e Foregene mo tali sa'o PCR.O le D-Taq DNA polymerase e malosi lona fa'apalepale i ituaiga PCR fa'alavelave fa'alavelave, ma e mafai ona fa'atupuina lelei le aofa'i o DNA i faiga fa'alavelave lavelave eseese, ma e mafai ona o'o atu i le 2Kb/min le saoasaoa fa'aopoopo, lea e fetaui lelei mo le tali atu o le PCR Direct.
Fa'amatalaga
50×20µl rxns, 200×20µl rxns, 500×20µl rxns, 2000×20µl rxns
Vaega o pusa
Vaega I | Faipule faipule |
Foregene Protease Plus | |
6x DNA Loading Buffer | |
Vaega II | 2× M1 PCR FaigofieTMFa'afefiloi(UNG) |
Faatonuga |
Fa'apitoa & itu lelei
■E leai se taimi e alu ai ma taugata DNA e manaʻomia.
■ O le faʻataʻitaʻiga manaʻoga e laʻititi, e pei o le 5mg isi isumu poʻo le 2-5mm siʻusiʻu isumu e mafai ona suʻeina.
■ E leai ni togafitiga faʻapitoa e pei o le oloina ma le tuʻimomomoina e manaʻomia, ma o le taotoga e faigofie.
■ O le faiga o le PCR sili ona lelei e maua ai le PCR e maualuga atu le tulaga maʻoti ma sili atu le faʻapalepale i PCR tali faʻalavelave.
■ faiga PCR e tetee atu i le filogia 2×M1-PCR FaigofieTMFaʻafefiloi (UNG), lea e faʻaumatia lelei le faʻaleagaina e mafua mai i oloa PCR ma faʻamautinoa le faʻapitoa ma le saʻo o le faʻalauteleina.
Fa'asologa o pusa
Avanoa o le faʻaoga: siʻusiʻu isumu, taliga isumu, maso ma isi mea.
DNA fa'amatu'u mai le fa'ata'ita'iga lysis: na'o le fa'aaogaina o se ata PCR.
O le pusa e mafai ona faʻaogaina mo faʻamoemoega nei: faʻamaonia o le transgenosis, faʻasologa o manu, ma isi.
Fa'agasologa o galuega
Teuina ma le ola fa'asao
Vaega I o lenei pusa e tatau ona teuina ile 2-8℃.
E mafai ona teuina le Reagent Buffer AL mo le 12 masina i lalo o tulaga mago;e mafai ona teuina i le 2-8 ℃ mo le teuina umi.
Reagent Foregene Protease ei ai se fua fa'atatau.Ina ia mautinoa lona gaioiga ma le mautu, faʻamolemole teu i le 4 ℃ mo le 12 masina.
Reagent 6×DNA Loading Buffer e mafai ona teuina i le 4 ℃ poʻo le -20 ℃ mo se taimi umi.
Vaega II o lenei pusa e tatau ona teuina ile -20℃.
Reagent 2×M1 PCR EasyTM Mix(UNG), pe a fa'aaoga soo, e mafai foi ona teuina i le 4 ℃ mo le teuina mo taimi pupuu (fa'aoga i totonu ole 10 aso).